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瑞舒伐他汀联合氯沙坦对OX--LDL诱导人单核巨噬细胞肝X受体表达的影响
摘要
本研究旨在探讨瑞舒伐他汀联合氯沙坦对氧化低密度脂蛋白(OX--LDL)诱导的人单核巨噬细胞肝X受体(LXR)表达的影响,通过体外细胞实验,对比不同药物处理组细胞中LXR的表达水平,分析两种药物联合应用在调节脂质代谢和抗炎过程中的潜在协同作用,为动脉粥样硬化等相关疾病的治疗提供理论依据。
关键词
瑞舒伐他汀;氯沙坦;OX--LDL;人单核巨噬细胞;肝X受体
一、引言
动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病的主要病理基础,其发病机制复杂,涉及脂质代谢紊乱、炎症反应等多个环节。氧化低密度脂蛋白(OX--LDL)在AS的发生发展中起关键作用,它可诱导单核细胞向巨噬细胞转化,并促使巨噬细胞摄取脂质形成泡沫细胞。肝X受体(LXR)作为核受体超家族成员,是体内脂质代谢和炎症反应的重要调节因子,激活LXR可促进胆固醇逆向转运,发挥抗AS作用。瑞舒伐他汀是一种他汀类药物,可通过抑制羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降低胆固醇水平;氯沙坦是血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂,除降压作用外,还具有抗炎、抗氧化等多种心血管保护作用。已有研究表明,瑞舒伐他汀和氯沙坦单独使用对LXR表达有一定调节作用,但二者联合应用对OX--LDL诱导的人单核巨噬细胞LXR表达的影响尚不明确。因此,本研究拟通过体外实验,探究瑞舒伐他汀联合氯沙坦对OX--LDL诱导人单核巨噬细胞LXR表达的影响,为临床治疗AS相关疾病提供新的思路。
二、材料与方法
(一)实验材料
细胞株:人单核巨噬细胞株(THP-1)购自中国典型培养物保藏中心。
主要试剂:瑞舒伐他汀(批号:XXX)、氯沙坦(批号:XXX)购自知名制药公司;氧化低密度脂蛋白(OX--LDL,批号:XXX);RPMI1640培养基(批号:XXX)、胎牛血清(FBS,批号:XXX)购自Gibco公司;兔抗人LXRα多克隆抗体(批号:XXX)、鼠抗人β-actin单克隆抗体(批号:XXX)购自CellSignalingTechnology公司;HRP标记的山羊抗兔IgG和山羊抗鼠IgG(批号:XXX)购自JacksonImmunoResearch公司;Trizol试剂(批号:XXX)、逆转录试剂盒(批号:XXX)、SYBRGreenPCRMasterMix(批号:XXX)购自TaKaRa公司。
主要仪器:二氧化碳培养箱(型号:XXX,ThermoFisherScientific)、倒置相差显微镜(型号:XXX,Olympus)、低温高速离心机(型号:XXX,Eppendorf)、酶标仪(型号:XXX,BioTek)、实时荧光定量PCR仪(型号:XXX,ABI)、Westernblot电泳及转膜装置(型号:XXX,Bio-Rad)。
(二)实验方法
细胞培养与分组处理
将THP-1细胞培养于含10%FBS的RPMI1640培养基中,置于37℃、5%CO?培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期,调整细胞密度为1×10?cells/mL,接种于6孔板中,每孔2mL。实验分为以下6组:
对照组:仅加入正常培养基。
OX--LDL组:加入终浓度为50μg/mL的OX--LDL处理24h。
瑞舒伐他汀组:先加入终浓度为10μmol/L的瑞舒伐他汀预处理2h,再加入50μg/mL的OX--LDL处理24h。
氯沙坦组:先加入终浓度为10μmol/L的氯沙坦预处理2h,再加入50μg/mL的OX--LDL处理24h。
瑞舒伐他汀+氯沙坦低剂量组:先同时加入终浓度为5μmol/L的瑞舒伐他汀和5μmol/L的氯沙坦预处理2h,再加入50μg/mL的OX--LDL处理24h。
瑞舒伐他汀+氯沙坦高剂量组:先同时加入终浓度为10μmol/L的瑞舒伐他汀和10μmol/L的氯沙坦预处理2h,再加入50μg/mL的OX--LDL处理24h。
实时荧光定量PCR检测LXRα和LXRβmRNA表达
按照Trizol试剂说明书提取各组细胞总RNA,测定RNA浓度和纯度。取1μgRNA,按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录合成cDNA。以cDNA为模板,采用SYBRGreenPCRMasterMix进行实时荧光定量PCR反应。引物序列如下:
LXRα上游引物:5-XXXXXXXXXX-3,下游引物:5-XXXXXXXXXX-3;
LXRβ上游引物:5-XXXXX
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