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方法:
本法系依据蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸,其在280nm波
长处具最大吸光度,在一定范围内其吸光度大小与蛋白质浓度呈正比。本法操作简便快速,
适用于纯化蛋白质的检测。
范围:
本操作程序适用于纯化中和纯化后的中间产品和制剂成品的蛋白含量检测。
责任:
操作人员:
严格按照此规程要求进行操作。
岗位主管:
起草文件,并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新;
监督操作规程是否与实际过程一致,资源是否满足要求;
培训,确保此操作规程的正确实施。
程序:
1术语解释
无
2仪器设备
2.1生物分光光度仪(Eppendorf,型号BioPhotometer)
2.2移液管,1000μL;200μL;
2.3单通道移液器,200μL;1000μL;
2.41.5mlEP管。
2.5比色皿(10mm光程)。
3试剂
3.1超纯水()
3.2空白对照溶液:供试品相对应缓冲体系。
4供试品配制
4.1选用空白对照溶液稀释供试品,要求A280吸光值至少大于0.1A,最佳线性范围在1.0~1.5A
之间。如无供试品空白对照溶液,则用纯化水作为空白对照。
4.2单次稀释倍数不超过10倍,否则应进行分步稀释。
4.3放行检测时需分别稀释获得至少3份稀释液进行平行检测。
5操作过程
5.1打开仪器开关。
5.2准备好比色皿,空白对照和供试品溶液。
5.3在面板检测方法中选择需要的方法,蛋白含量检测选择“4Protein”。
5.4使用前先检查所选方法的参数设置是否正确(检测方法和比色皿光路长度)。
5.5放入空白对照,按“blank”键,读数应为0.000A。
Method
Summary:
Thismethodisbasedonaromaticaminoacidssuchastyrosineandtryptophancontainingconjueddouble
bondsinproteinmolecu.Ithastheumabsorbanceatthewavelengthof280nm,anditsabsorbance
isproportionaltotheproteinconcentrationwithinacertainrange.Thismethodiseasytooperateandis
suitableforthedetectionofpurifiedproteins.
范围:
Thisstandardoperatingprocedureissuitableforthedetectionofproteincontentofpurified,neutralized,and
purifiedintermediateproductsandfinishedpreparations.
责任:
Operator:
Operatestrictlyinaccordancewiththe
requirementsofthisprocedure.
JobSupervisor:
Draftthedocumentsandensuretheaccuracyoftheoperatingprocedures,thecompletenessof
thetechnicalcontentandthetimelyupdateofthedocuments;Supervisewhethertheoperating
proceduresareconsistentwiththeactualprocessandwhethertheresources
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