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蛋白质的结构与功能授课用;蛋白质研究的历史

1833年，从麦芽中分离淀粉酶，随后从胃液中分离到类似胃蛋白酶的物质。

1864年，血红蛋白被分离并结晶。

19世纪末，证实蛋白质有氨基酸组成，并合成了多种短肽。

20世纪初，发现蛋白质的二级结构，完成胰岛素一级结构测定。

20世纪中叶，各种蛋白质分析技术相继建立，促进了蛋白质研究迅速发展。

1962年，确定了血红蛋白的四级结构。

20世纪90年代，功能基因组与蛋白质组研究展开。

;第一节蛋白质是生命的物质基础;分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。朊病毒

含量高：人体的45%为蛋白质，脾、肺、肌肉含量均超过80%，细菌的含量为50~80%，干酵母的含量为46.6%。;;很多蛋白质本身就为药物（如一些多肽、激素等）；

即使有效成分不是蛋白质，但在提取、分离时必然遇到有关蛋白质的处理问题；

蛋白质的研究对有关药物的生产、储存、分析和应用等也具有重要的现实意义。;第二节蛋白质的化学组成;蛋白质平均含N量为总蛋白的16％，这是凯氏定氮法测蛋白质含量的理论依据：

蛋白质含量＝蛋白质含N量×6.25

注意：一定要排除非蛋白质的

氮对蛋白质含量测定的影响;组成蛋白质的基本结构单位是什么呢？;蛋白质的水解;蛋白质的基本结构单位——氨基酸;存在自然界的氨基酸有180余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20余种（基本氨基酸），且均属于L-α-氨基酸（除甘氨酸）。;从氨基酸的结构通式可以看出：;组成蛋白质的氨基酸共有20种;I非极性氨基酸（八种）;I非极性氨基酸（八种）;II极性不带电荷的氨基酸（七种）;II极性不带电荷的氨基酸（七种）;III带负电荷的氨基酸（两种）;IV带正电荷的氨基酸（三种）;非极性氨基酸：缬、甲、脯、丙、亮、异亮、苯、色

写家谱并晾一晾本色;通常是常见氨基酸的衍生物。例如：;1986年--硒代半胱氨酸，硒元素取代了半胱氨酸中的硫元素；

2002年--吡咯赖氨酸，赖氨酸的ε-氨基与（4R，5R）-4-取代-吡咯啉-5-羧酸以酰胺键相连而形成的化合物。

是生物体内组成蛋白质的第21和第22种基本氨??酸，均属于L-α-氨基酸。

;以游离或结合态存在细胞或组织中，大部分是常见氨基酸的衍生物或异构型。例如：;1.物理性质;2.化学性质

氨基酸的两性解离与等电点;pI是氨基酸的特征常数;紫外吸收性质;在加热条件及弱酸环境下，氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。

由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可以作为氨基酸的定量分析方法。;寡肽、多肽的组成单位

多种生物活性物质的前体：NO前体—精氨酸；褪黑色素前体-色氨酸。

作为神经递质（谷氨酸、γ-氨基丁酸）

氧化分解产生ATP

作为糖异生的前体;蛋白质分子中氨基酸是如何连接的呢？;两个氨基酸分子头尾连接起来;第33页，共96页。;一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基之间失水形成的酰胺键称为肽键，所形成的化合物称为肽。;由两个氨基酸组成的肽称为二肽，三个氨基酸组成的肽称为三肽，依此类推。

由十个以下氨基酸组成的肽称为寡肽（oligope-

ptide）;十个以上氨基酸组成的肽称为多肽或多肽链（polypeptide）。

肽链中的氨基酸因为脱水缩合而非原来的完整分子单元，故将其称为氨基酸残基（residue）。;;第37页，共96页。;第三节蛋白质的分子结构;蛋白质是具有三维空间结构的高分子物质，根据蛋白质肽链的折叠方式和复杂程度，将蛋白质结构分为…….;;;蛋白质的一级结构;一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学的基础，但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素。;蛋白质的一级结构的测定;如何测定蛋白质一级结构：氨基酸序列;1.小片段肽链测序：;N末端基氨基酸测定;苯异硫氰酸酯（PITC);多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。;羧肽酶是一种肽链外切酶，它能特异地从多肽链的C-端将氨基酸依次水解下来，是C末端分析常用的方法。目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；;2.大片段肽链测序：;测序步骤;C.测定蛋白质分子中多肽链的数目

蛋白质末端分析

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳;D.多肽链断裂成多个肽段

以便建立两个重要的氨基酸序列参考点

可采用两种或