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*第1页，共21页，星期日，2025年，2月5日第一节光谱分析技术第二节电化学分析第三节电泳技术第四节层析技术第五节离心技术第六节自动生化分析技术只讲第一节，其它内容在《临床检验仪器学》中讲授。本章内容概要*第2页，共21页，星期日，2025年，2月5日教学目标和要求1、掌握分光光度技术的基本原理及定性和定量方法。2、熟悉分光光度计的的基本结构和操作方法光源检查和波长校正、原子分光光度计的类型和影响荧光分析的因素3、了解其他光谱分析技术的基本原理及在生化检验中的应用。*第3页，共21页，星期日，2025年，2月5日第一节光谱分析技术分光光度技术的基本原理分光光度计的基本结构分光光度计的操作方法分光光度技术的定性和定量方法*第4页，共21页，星期日，2025年，2月5日光谱分析技术原理：利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。光谱分析技术分类：发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光度法和红外光谱法散射光谱分析技术：比浊法*第5页，共21页，星期日，2025年，2月5日一、分光光度技术的基本原理（一）吸光度与透光度A=-lgT=-lgI/I0=lgI0/I当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度，即：T=I/I0T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度即：*第6页，共21页，星期日，2025年，2月5日（二）Lambert-Beer定律Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其表达式为：A=KLC式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度（Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。）*第7页，共21页，星期日，2025年，2月5日据Lambert-Beer定律，当液层厚度为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系数(ε)。ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数。*第8页，共21页，星期日，2025年，2月5日（三）偏离Lambert-Beer定律的因素应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学和化学两方面的因素。1．光学因素：要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。2．化学因素：浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡。*第9页，共21页，星期日，2025年，2月5日二、分光光度计的基本结构最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计光源单色器比色杯检测器显示器五大部份结构：*第10页，共21页，星期日，2025年，2月5日（一）光源光源定义：指一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱，并有足够的强度和良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。光源种类：可见光分光光度计常用光源是钨灯或卤钨灯。紫外光光度计常用氢灯作为光源。*第11页，共21页，星期日，2025年，2月5日（二）单色器定义：将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分光系统或单色器。种类：滤光片棱镜光栅*第12页，共21页，星期日，2025年，2月5日（三）比色杯又称为吸收池或比色皿材料：常用无色透明、耐腐蚀和耐酸碱的玻璃或石英材料做成（五）显示器（四）检测器检测器是将透过溶液的光信号转换为电信号，并将电信号放大的装置。常用的检测器为光电管和光电倍增管。是将光电管或光电倍增管放大的电流通过仪表显示出来的装置。*第13页，共21页，星期日，2025年，2月5日三、分光光度计的操作方法（一）分光光度计的基本操作以721-A型分光光度计为例，其基本的操作步骤为：1.开721-A分光光度计的开关，将比色池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热。2.将波长旋至测定的波长。3.将空白液、