兰州大学酶促反应动力学2讲课文档.pptVIP

兰州大学酶促反应动力学;*;一、化学动力学基础;（二）反应分子数和反应级数;（三）各级反应的特征;二、底物浓度对酶反应速率的影响;酶与底物的中间络合物学说（Henri和Wurtz）;（二）酶促反应的动力学方程式;米氏方程的推导;酶反应速度与底物浓度的关系曲线;2.动力学参数的意义;所以1/Km表示形成ES的趋势大小;f.Km和米氏方程的实际应用

若已知某个酶的Km值，可以计算在某一个底物浓度时，反应速度相当于最大反应速度的百分率。

g.Km可以帮助推断某一反应的方向和途径;（2）Vmax和k3(kcat)的意义;（3）Kcat/Km的意义;只有Kcat/Km可以客观地比较不同的酶或同一种酶催化不同底物的催化效率;3.利用作图法测定Km和Vmax值;（2）Eadie-Hofstee作图法;（3）Hanes-Woolf作图法;（4）Eisenthal作图法;（三）多底物的酶促反应;;NAD＋与NADH相互竞争E上的NAD＋结合部位;②随机反应;（2）乒乓反应;2.双底物反应的动力学方程;★乒乓机制的动力学曲线是两组平行直线

★表观米氏常数KmA′（KmB′）随[B]（[A]）浓度的增大而增大

★表观最大反应速度Vmax′随[B]（[A]）的增大而增大;（2）序列机制的底物动力学方程;★序列机制的动力学曲线是两组相交直线（交于X轴负侧）

★交点在X轴：表观KmA′（KmB′）不随[[B]（[A]）浓度变化而变化（KmA′=KmA、KmB′=KmB）

★交点在X轴上：表观KmA′（KmB′）随[[B]（[A]）浓度的增加而减小

★交点在X轴下：表观KmA′（KmB′）随[[B]（[A]）浓度的增加而增大

★表观最大反应速度Vmax′随[B]（[A]）的增大而增大;三、酶的抑制作用;;（二）抑制作用的类型;（1）竞争性抑制（Competitiveinhibition）

?抑制剂具有与底物类似的结构，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的EI复合物，阻止底物与酶结合。

可以通过增加底物浓度而解除此种抑制。;（2）非竞争性抑制（noncompetitiveinhibition）

底物和抑制剂可以同时与酶结合，但是，中间的三元复合物ESI不能进一步分解为产物，因此，酶的活性降低。

抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，其结构可能与底物无关。不能通过增加底物浓度的办法来消除非竞争性抑制作用。;（3）反竞争性抑制

酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合。

E+S→ES+I→ESI≠P

常见于多底物的酶促反应中;（三）可逆抑制作用与不可逆抑制作用的鉴别;[E];（四）可逆抑制作用动力学;2、非竞争性抑制;3、反竞争性抑制;可逆抑制的动力学比较;（五）一些重要的抑制剂;②有机汞、有机砷化合物

抑制机理：使酶的巯基烷化

毒理：主要与还原型硫辛酸辅酶反应，抑制丙酮酸氧化酶系统。

解毒剂：二巯基丙醇（BAL）、Cys、GSH等过量的巯基化合物。;③重金属

Ag、Cu、Hg、Cd、Pb能使大多数酶失活，EDTA可解除。

④、烷化物

★含卤素的烷化物（碘乙酸、碘乙酰胺、卤乙酰苯等）常用于鉴定酶中巯基。

⑤氰化物、硫化物、CO

与含铁卟啉的酶中的Fe2+结合，阻抑细胞呼吸;⑥青霉素

不可逆抑制糖肽转肽酶

⑦还原剂

巯基乙醇、二硫苏糖醇等巯基试剂还原酶的二硫键、含活泼双键试剂（与—ＳＨ、—ＮＨ２反应）

Ｎ—乙基顺丁烯二酰亚胺

⑧亲电试剂

四硝基甲烷，可使Tyr硝基化。

;（2）专一性不可逆抑制剂

此类抑制剂仅仅和某一种酶的活性部位的必需基团反应。;②Kcat型不可逆抑制剂（自杀性底物）

具有与底物相似的结构，不仅能与酶结合，而且潜伏的反应基团（latentreactivegroup）能被酶催化而活化，并与酶活性中心必需基团进行不可逆结合。?;2、可逆抑制剂;★抑制剂与药物开发

Kcat型不可逆抑制剂的专一性程度很强，前景广阔

底物类似物型的竞争性抑制剂最易开发

过度态底物类似物型药物最具价值(高效\特异);;（二）酶的稳定性温度

在某一时间范围内，酶活性不降低的最高温度称该酶的稳定性温度。

?

酶浓度高、不纯、有底物、抑制剂和保护剂会使稳定性温度增高。

酶的保存：

①液体酶制剂可以利用上述5种因素中的几种，低温短暂保存。

②冻干粉可在低温冰箱中较长期保存。;五、pH对酶促反应速度的影响;谢谢大家！