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青蒿体外止血活性部位筛选、鉴定及应用探索

一、引言

1.1研究背景与意义

青蒿（ArtemisiaannuaL.）作为一种常见的中草药，在传统医学领域发挥着重要作用。《中华人民共和国药典（2020年版）》记载，青蒿味苦、辛，性寒，归肝、胆经，具有清虚热、除骨蒸、解暑热、截疟、退黄等功效，常被用于治疗温邪伤阴、夜热早凉、阴虚发热、骨蒸劳热、暑邪发热、疟疾寒热、湿热黄疸等病症。在传统应用中，青蒿常与其他药物配伍，以发挥协同治疗作用。如青蒿鳖甲汤，由青蒿、鳖甲、知母、生地、丹皮等组成，用于治疗温病后期，余热未清，邪伏阴伤，虚热内生之夜热早凉、热退无汗或低热不退等症。

除了药典记载的功效，古籍中对青蒿的止血功效也早有论述。《卫生易简方》记载“鼻中衄血：青蒿捣汁服之，并塞鼻中，极验”；《永类钤方》载“酒痔便血︰青蒿（用叶不用茎，用茎不用叶），为末。粪前冷水，粪后水酒调服”；《肘后方》载“金疮扑损︰用青蒿捣封之，血止则愈”；《玉楸药解》亦言其“止金疮血流”。这些古籍记载表明，青蒿在止血方面具有一定的应用历史。

然而，目前国内外对青蒿的研究主要集中在青蒿素及其衍生物上。青蒿素是从植物青蒿中提取的抗疟疾药，具有高效、速效、低毒的特点，是我国唯一被世界卫生组织认可的按西药研究标准研究开发的植物药，我国是世界上青蒿素原料药最大的生产国，产量占全球九成。相比之下，对青蒿其他活性成分的研究及报道较少。虽然近年来有研究表明青蒿中具有止血作用的成分，但其具体成分及作用机制尚未完全阐明。

鉴于此，开展对青蒿体外止血活性部位的筛选及其应用研究具有重要意义。一方面，有助于深入挖掘青蒿的药用价值，拓宽对青蒿药理活性的认识，为青蒿资源的综合利用提供新的方向。另一方面，若能筛选出青蒿的止血活性部位并开发出相关应用，将为临床止血治疗提供新的选择，丰富医药领域的治疗手段，具有潜在的应用前景。

1.2研究目的与内容

本研究旨在通过一系列实验，筛选出青蒿体外止血活性部位，并对其进行深入研究，具体研究目的和内容如下：

筛选青蒿体外止血活性部位：采用体外止血模型，选择青蒿不同部位提取物进行筛选，确定具有明显止血作用的提取物，为后续研究奠定基础。

鉴定止血活性成分：通过纯化技术和质谱分析等方法，对筛选得到的青蒿中可能的止血活性成分进行鉴定，明确其化学结构和组成。

探讨青蒿止血作用机制：运用分子生物学和细胞学技术，从细胞和分子层面研究青蒿中止血活性成分的作用机制，揭示其止血的内在原理。

分析青蒿止血活性成分的临床应用价值：探讨青蒿中止血活性成分的临床应用前景及其用药安全性，为其临床应用提供科学依据。

1.3国内外研究现状

国内外对青蒿的研究主要集中在青蒿素及其衍生物的抗疟疾、抗菌、抗病毒等方面。在止血活性研究方面，虽然有古籍记载青蒿的止血功效，但相关的现代实验研究相对较少。2009年重庆大学隋婧的《青蒿体外止血活性部位筛选及其应用研究》一文对青蒿止血作用作了初步研究，发现青蒿正丁醇萃取部分及α部分具有良好的体外促凝作用，α部分为青蒿止血的有效部位，青蒿精油具有显著的抗菌作用。将α部分与青蒿精油按1：1混合制作的新型抗菌止血贴剂具有良好的止血抗菌效果。然而，该研究对于止血活性成分的鉴定还不够深入，作用机制也尚未完全明确。

此外，还有一些关于青蒿在其他方面的研究，如青蒿对免疫系统的调节作用、对肿瘤细胞的抑制作用等，但这些研究与青蒿的止血活性关联不大。总体而言，目前青蒿止血活性的研究仍存在诸多空白与不足，缺乏系统深入的研究。本研究将在前人研究的基础上，进一步深入探究青蒿的止血活性，有望填补该领域的部分空白，为青蒿的开发利用提供更全面、更科学的依据。

二、青蒿体外凝血评价方法的筛选

为了准确筛选出青蒿的体外止血活性部位，需要选择合适的体外凝血评价方法。本部分将通过制备青蒿提取物，并对常用的体外凝血实验方法进行比较，从而筛选出最适宜的评价方法。

2.1青蒿提取物的制备

将青蒿干燥全草粉碎后，称取一定量，加入75%乙醇进行浸提。浸提过程中，控制温度、时间和乙醇用量等条件，以确保有效成分充分溶出。浸提结束后，通过过滤等操作获得浸提液。

将浸提液进行减压浓缩，得到浓缩液。然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。具体操作如下：向浓缩液中加入等体积的石油醚，充分振摇后，静置分层，收集上层的石油醚萃取液；下层水相再加入等体积的乙酸乙酯，重复上述操作，收集乙酸乙酯萃取液；最后，对剩余水相加入等体积的正丁醇进行萃取，收集正丁醇萃取液。将各萃取液分别进行减压浓缩，得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物，备用。通过这种分步萃取的方式，可以将青蒿中的不同极性成分初步分离，以便后续对各部位提取物的止血活性进