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实验大肠杆菌的培养与分离;实验大肠杆菌的培养与分离;特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.;(二)细菌的常识;大肠杆菌;细菌的外形与大小;根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。
自养菌:
异养菌:
腐生菌
寄生菌大部分病原菌
;细菌的革兰氏染色;☆培养基;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;4.培养基的用途;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。;液体培养基：;☆无菌技术;（１）消毒定义：;消毒的方法：
1、100℃煮沸5-6min
2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min
3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒
4、氯气消毒水源
5、紫外线消毒
……;灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。
3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.;1、灼烧灭菌;2、干热灭菌：
160-170℃下加热1-2h。
3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;实验用具;第22页，共51页。;;二、大肠杆菌的培养和分离实验操作;（二）倒平板;注意事项：
1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板
2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒
3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.
4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌
5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.
;（三）大肠杆菌的扩大培养;菌种扩增;（四）大肠杆菌的划线分离;1、划线分离法无菌操作台上用接种环取菌后在固体培养基的平板上连续划线.;平板划线的操作;不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。;;第34页，共51页。;第35页，共51页。;（四）大肠杆菌的划线分离;第37页，共51页。;问题讨论;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;第42页，共51页。;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;（五）大肠杆菌分离后保存;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?;4.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;5.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?;【课堂练习】;谢谢大家！
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