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苏云金芽胞杆菌新型杀虫基因：发掘策略与活性解析

一、引言

1.1研究背景

在农业生产和病虫害防治领域，苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt）占据着举足轻重的地位，是目前研究最为深入且应用最为广泛的杀虫微生物之一。Bt是一种革兰氏阳性、杆状、能形成内生芽孢的土壤细菌，在其芽孢形成过程中，会产生具有高度特异性杀虫活性的伴孢晶体蛋白，即δ-内毒素，也被称为杀虫晶体蛋白（InsecticidalCrystalProteins，ICPs）。这些晶体蛋白对多种害虫具有强大的毒杀作用，涵盖鳞翅目、膜翅目、直翅目、鞘翅目等130多种害虫，因而成为生物防治中的关键微生物。

自1901年日本细菌学家石渡从患病家蚕幼虫中首次分离出该菌，1915年被正式命名为苏云金芽孢杆菌以来，其研究和应用取得了长足发展。1938年，第一个苏云金芽孢杆菌商品制剂Sporeine在法国问世，开启了其商业化应用的历程。此后，美国在1958年生产出可湿性粉剂，1969年Dulmage分离出HD-1菌株，其杀虫能力大幅提升，推动了Bt杀虫剂的广泛应用。我国对苏云金杆菌的研究起步于1955年，曹骥先生等从法国引进的商品制剂中分离菌株用于防治玉米螟，后续不断发展，在解决生产过程中的技术问题后，实现了稳定发展。

Bt能够在多种环境中生存，从热带雨林到北极冻土带，从土壤、昆虫尸体到植物体表面等，土壤是其分布最为丰富的生境，全球估计约有60,000余个苏云金芽孢杆菌分离物。其杀虫作用主要源于孢子形成过程中产生的伴孢晶体，经敏感昆虫口服后，在中肠碱性环境中降解为活性多肽片断，与中肠受体蛋白结合，形成细胞膜通道，破坏渗透膜，最终导致虫体死亡。

随着分子生物学技术的飞速发展，对Bt的研究深入到基因层面。自1981年第一个杀虫晶体蛋白基因被分离以来，迄今全世界从Bt中发现并正式命名的ICP基因已有42大类，总数超过322种。我国在国家“863”“973”等计划的大力支持下，Bt分子生物学研究发展迅速，1997年以来已克隆了47种ICP基因，占同期国际新记载Bt基因总数的1/3以上。

然而，长期单一使用Bt制剂或转Bt基因作物，使得害虫对Bt产生抗性的问题日益严重。例如，小菜蛾、棉铃虫等害虫对Bt的抗性不断增强，导致Bt制剂的防治效果显著下降。据相关研究表明，在一些地区，小菜蛾对Bt制剂的抗性倍数已高达数百倍。这不仅严重影响了Bt在农业生产中的持续有效应用，还对生态平衡造成了潜在威胁。

此外，现有的Bt杀虫基因和蛋白的防治范围存在一定局限性，无法有效应对一些新出现的害虫种类以及对现有Bt毒素不敏感的害虫。例如，对于某些刺吸式口器害虫，如蚜虫、飞虱等，传统的Bt毒素往往难以发挥作用。因此，为了有效解决害虫对Bt的抗性问题，拓展Bt的防治范围，发掘新型Bt杀虫基因已成为当务之急。新型杀虫基因的发掘，不仅能够为开发新型Bt生物农药和培育抗虫转基因作物提供关键基因资源，还有助于深入理解Bt与害虫之间的相互作用机制，推动生物防治技术的创新发展。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过多种技术手段，从不同来源的样本中分离苏云金芽胞杆菌菌株，并利用生物信息学和分子生物学技术，深入发掘新型杀虫基因。通过对这些新型基因的克隆、表达及活性分析，明确其对不同害虫的杀虫活性，为生物防治提供具有自主知识产权的新型基因资源。

在理论层面，本研究有助于深入了解苏云金芽胞杆菌杀虫基因的多样性和进化规律，进一步揭示Bt与害虫之间的分子互作机制。通过对新型杀虫基因的研究，可以丰富我们对杀虫蛋白结构与功能关系的认识，为后续基因改造和优化提供理论基础。

在实践应用方面，发掘的新型杀虫基因具有巨大的应用潜力。一方面，可用于开发新型的苏云金芽胞杆菌生物农药，提高生物农药的防治效果和稳定性，减少化学农药的使用，降低环境污染，符合绿色农业发展的需求。另一方面，这些新型基因可以作为重要的基因资源，用于培育抗虫转基因作物，增强作物对害虫的抗性，提高农作物产量和品质，保障粮食安全。同时，新型杀虫基因的应用还可以延缓害虫对现有Bt毒素的抗性发展，延长Bt生物防治产品的使用寿命，为农业可持续发展提供有力支持。

二、苏云金芽胞杆菌杀虫基因研究进展

2.1苏云金芽胞杆菌概述

苏云金芽胞杆菌的发现历程充满了探索与惊喜。1901年，日本细菌学家石渡繁胤从患病家蚕幼虫中成功分离出一种细菌，当时将其命名为猝倒杆菌，这便是苏云金芽胞杆菌的首次现身。然而，它的正式定名则是在1911年，德国科学家恩斯特?贝尔林克从德国苏云金省的地中海粉螟幼虫