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便作3、古代在场科技专题

专题1、基因工程

什么是基因工程？1.1DNA支:组技术基本工具

一、“分子手术刀”一一限制性酸内切酶（限制酶）

㈠起源：主要是从原生物中分离纯化出来八

㈡功效：能够识别双链DNA分子某种特定甘酸序列，而且使每一条链中特定部位两个首

酸之间磷酸二酯犍断开，所以具备专一性。

㈢结果：经限制酶切割产生DNA片段末端通常有两种形式，黏性末端和平末端。

二、“分子缝合针”一一DNA连接酷

（）功效:将切下来DNA片段拼接成新DNA分了。连接部：磷酸二酣键，不是氢键。

㈡两种DNA连接酶E（・coliDNA连接酶和T.DNA连接酶）比较：

2.同点：都缝合磷酸二酯键。

2.区分：E-coliDNA连接触起源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补黏性末端之间磷酸

二醋键连接起来；而TDNA连接酶起源于T,噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端之间效

率较低。

㈢与DNA聚合酣作用异同:DMA聚合酶只能将单个苗酸加到已经有苗酸片段末端，形成

磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段末端，形成磷酸二酯键。

三、“分子运输车”一一载体与（细胞膜上载体有什么区分？）

㈠作为载体必要条件：能在受体细胞中复制并稳定保留；具备一至多个限制酶切点，供外源

DNA片段插入；具备标识基因，供重组DNA判定和选择；对受体细胞无害、易分离。

㈡最惯用载体是质粒：是一个裸露、结构简单、独立于细菌DNA之外，并具备自我复制能力

很小双链环状DNA分子。

㈢其它载体：噬菌体衍生物、动植物病毒。

1.2基因工程基本操作程序

一、目标基因获取什（么是目标基因？）

㈠获取方法：原基因采取直接分离取得，真基因是人工合成。

㈡从基因文库中获取目标基因

什么是基因文库？什么是基因组文库？什么是部分基因文库？三者间是什么关系？

怎样从基因文库中获取目标基因？

㈢利用PCR技术扩增目标基因

1.什么是PCR技术？2.原理：DNA双链复:制。3.PCR技术需哪些必要条件？PCR结果是什么？

4.过程：变性一退火一延伸一数次重复。

㈣直接人工合成。

二、基因表示载体构建（过程实际上是不一样起源基因重组过程，是基因工程关键）

㈠构建基因表示载体目标是什么？怎样构建？

㈡一个基因表示载体组成：复制原点+开启子+目标基因+终止子+标识基因

什么是开启子、终止子？它们分别在基因表示载体上什么位置？各有什么作用？标识基因有

什么作用？

三、将目标基因导入受体细胞

㈠转化概念：是目标基因进入受体细胞内，而且在受体细胞内维持稳定和表示过程。

㈡惯用转化方法

L将目标基因导入植物细胞：采取最多方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通

道法等。导入到了植物细胞什么位置？

2.将目标基因导入动物细胞：最惯用方法是显微注射技术。此方法受体细胞多是受精卵.

3.将目标基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞优点有哪些？最惯用原核细胞是什

么？转化方法是什么？

㈢重组DNA导入受体细胞后，筛选含有基因表示载体受体细胞依据是标识基因是否表示。

四、目标基因检测和表示

㈠首先要检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目标基因。方法：DNA分子杂交技术，

方法原理是什么？

㈡其次还要检测目标基因是否转录出了砒财。方法：用标识目标基因作探针与mRNA杂交。

㈢最终检测目标基因是否翱译成蛋白质。方法：从转基因生物中提取蛋白质，用对应抗体进

行抗原一抗体杂交。

㈣有时还需进行个体生物学水平判定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

1.3基因工程应用

一、植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物品质。

二、动物基因工程：提升动物生长速度、改进