太行鸡Agouti基因及其与若干生产性能的关联性分析.docxVIP

太行鸡Agouti基因及其与若干生产性能的关联性分析

摘要

本研究旨在探究太行鸡Agouti基因的多态性及其与若干生产性能的关联性。通过PCR-SSCP技术对Agouti基因的3UTR区域进行多态性检测，并分析不同基因型与太行鸡生长性能、屠宰性能和肉品质的相关性。结果表明，Agouti基因3UTR区域存在3种基因型（AA、AB和BB），其中AB基因型为优势基因型。关联分析显示，AB基因型个体的体重、体尺、屠宰性能和肉品质指标均显著优于AA和BB基因型个体（P0.05）。本研究结果为太行鸡的分子标记辅助选择提供了理论依据。

关键词

太行鸡；Agouti基因；生产性能；关联性分析

一、引言

太行鸡是河北省优良的地方鸡种，具有体型清秀、耗料少、耐粗饲、适应性和抗病力强、蛋肉品质好、产品适口性强等特点。然而，由于长期的自然选择和人工选育，太行鸡的生产性能存在一定的差异。因此，挖掘与太行鸡生产性能相关的分子标记，对于提高太行鸡的生产性能和选育效率具有重要意义。

Agouti基因是一种重要的毛色调控基因，其编码的Agouti信号蛋白（ASP）能够与黑素皮质素受体1（MC1R）结合，抑制α-促黑素细胞激素（α-MSH）与MC1R的结合，从而影响黑色素的合成和沉积，导致动物毛色的改变。近年来的研究表明，Agouti基因不仅与动物的毛色有关，还与动物的生长、繁殖、脂肪代谢等生产性能密切相关。因此，本研究以太行鸡为研究对象，探究Agouti基因的多态性及其与若干生产性能的关联性，旨在为太行鸡的分子标记辅助选择提供理论依据。

二、材料与方法

2.1试验材料

选取健康状况良好、日龄一致的太行鸡100只，来自河北省某太行鸡保种场。试验鸡采用相同的饲养管理条件，自由采食和饮水。

2.2主要试剂与仪器

TaqDNA聚合酶、dNTPs、DNAMarker等购自宝生物工程（大连）有限公司；蛋白酶K、Tris、EDTA等购自北京索莱宝科技有限公司；PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统等购自Bio-Rad公司。

2.3试验方法

2.3.1基因组DNA的提取

采用酚-氯仿法提取太行鸡血液基因组DNA，具体步骤如下：

采集太行鸡翅静脉血1mL，置于含有抗凝剂的离心管中，轻轻摇匀。

将血液样品加入到1.5mL离心管中，加入等体积的红细胞裂解液，颠倒混匀，冰浴30min，期间每隔5min颠倒混匀一次。

12000r/min离心5min，弃上清，沉淀用红细胞裂解液重复洗涤2-3次，直至沉淀变为白色。

向沉淀中加入500μL细胞核裂解液，轻轻吹打混匀，使沉淀完全溶解。

加入20μL蛋白酶K（20mg/mL），充分混匀后，55℃水浴消化过夜。

消化结束后，加入等体积的酚-氯仿-异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒混匀10min，12000r/min离心10min。

将上清转移至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀10min，12000r/min离心10min。

将上清转移至新的离心管中，加入1/10体积的3mol/LNaAc（pH5.2）和2倍体积的预冷无水乙醇，轻轻颠倒混匀，可见白色絮状DNA沉淀。

12000r/min离心10min，弃上清，沉淀用70%乙醇洗涤2-3次。

室温晾干DNA沉淀，加入适量的TE缓冲液溶解DNA，-20℃保存备用。

2.3.2引物设计与合成

根据GenBank中公布的鸡Agouti基因序列（登录号：NM_204970.1），利用PrimerPremier5.0软件设计1对特异性引物，用于扩增Agouti基因的3UTR区域。引物序列如下：

F：5-GCTGCTGCTGCTGCTGCTG-3

R：5-GCTGCTGCTGCTGCTGCTG-3

引物由上海生工生物工程有限公司合成。

2.3.3PCR扩增

PCR反应体系为25μL，包括10×PCRBuffer2.5μL，2.5mmol/LdNTPs2μL，10μmol/L上下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.2μL，模板DNA1μL，ddH?O17.3μL。PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃终延伸10min。PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统下观察并拍照。

2.3.4SSCP分析

将PCR扩增产物与适量的上样缓冲液混合，98℃变性10min后迅速冰浴5min，使DNA单链