毛细管电泳技术及应用.pptVIP

第29页，共68页，星期日，2025年，2月5日仪器流程与主要部件电压：0～30kV；分离柱不涂敷任何固定液；紫外或激光诱导荧光检测器；（可检测到：10-19～10-21mol/L）第30页，共68页，星期日，2025年，2月5日1.高压电源（1）0～30kV稳定、连续可调的直流电源；（2）具有恒压、恒流、恒功率输出；（3）电场强度程序控制系统；（4）电压稳定性：0.1%；（5）电源极性易转换；2.毛细管柱（1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差；（2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m第31页，共68页，星期日，2025年，2月5日3.缓冲液池化学惰性，机械稳定性好；4.检测器要求：具有极高灵敏度，可柱端检测；检测器、数据采集与计算机数据处理一体化；类型检测限/mol特点紫外-可见10-13～10-15加二极管阵列，光谱信息荧光10-15～10-17灵敏度高，样品需衍生激光诱导荧光10-18～10-20灵敏度极高，样品需衍生电导10-18～10-19离子灵敏，需专用的装置；第32页，共68页，星期日，2025年，2月5日CE具体操作步骤：毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。1).清洗毛细管对于一根新的或久未使用的毛细管，需用1mol/L的NaOH溶液、0.1mol/LNaOH溶液、超纯水依次清洗。在有些情况下还需用0.1mol/LHCl、甲醇或去垢剂清洗,强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子，甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质。第33页，共68页，星期日，2025年，2月5日在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。第34页，共68页，星期日，2025年，2月5日2).更替电泳缓冲液在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。上一步清洗过程结束后，毛细管和电极从清洗液中移至电泳缓冲液，不可避免地将强碱或强酸等溶液带至其中。缓冲液本身也会因挥发、电泳等而改变其离子强度。因此对于精确分析，每分析五次后需更换一次样品盘中的缓冲液。一般分析，半天更换一次即可。第35页，共68页，星期日，2025年，2月5日3）毛细管电泳的进样方式

进样量：毛细管长度的1%-2%；nL级、非常小；1.流体力学进样方式（1）进样端加压（2）出口端抽真空（3）虹吸进样第36页，共68页，星期日，2025年，2月5日毛细管一端插入样品瓶，加电压；2.电动进样方式进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样量大；离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去；特别适合黏度大的试样；3.扩散进样试样通过扩散作用进入分离柱端口处。第37页，共68页，星期日，2025年，2月5日Buffer:50mMphosphate–TEA(pH2.5)with4.0%HP-β-CD(w/v)and50%methanol;Appliedpotential:30kV;Sample:1mg/Lpropranololdissolvedin(A)(B)water,(C)methanol;(A)Pressureinjection0.5psi.,5s,(B)(C)electrokineticinjection10kV,5s.CABEffectofinjectionmode第38页，共68页，星期日，2025年，2月5日(A)ConditioningofthecapillarywithalowpHbuffercontainingCTAB,andinjectionofalongwaterplugintothecapillarybypressure;(B)Field-amplifiedinjectionofcationsandstack