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实时荧光PCR原理课件

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目录

壹

PCR技术概述

贰

实时荧光PCR原理

叁

实时荧光PCR仪器

肆

实时荧光PCR实验步骤

伍

实时荧光PCR的应用实例

陆

实时荧光PCR的挑战与展望

PCR技术概述

章节副标题

壹

PCR技术定义

技术特点

特异强灵敏度高

PCR技术简介

体外扩增DNA片段

01

02

PCR技术发展历程

起源于核酸研究，1971年提出体外扩增设想

起源与设想

1985年Mullis实现PCR，1988年发现Taq酶改进技术

技术实现与改进

广泛应用于生物医学，数字PCR提高灵敏度和精确度

现代应用与发展

PCR技术应用领域

助力基因组计划，研究物种进化。

生命科学

疾病诊断、病原体检测及制药。

医疗诊断

实时荧光PCR原理

章节副标题

贰

核酸扩增过程

加入荧光物质，实时监测PCR扩增中的荧光信号变化。

荧光信号监测

设定荧光阈值，通过Ct值计算模板DNA或RNA的起始浓度。

阈值与Ct值

荧光标记技术

荧光染料应用

SYBRGreen等染料结合DNA双链发光。

特异性荧光探针

TaqMan探针等特异性结合目标序列释放荧光。

实时监测机制

达设定荧光阈值的循环数，用于定量分析。

CT值判定

PCR中实时监测荧光信号累积，反映产物量变化。

荧光信号累积

实时荧光PCR仪器

章节副标题

叁

仪器组成部件

管理仪器运作的核心

控制部件

精确调控PCR反应温度

温控模块

光电模块

检测并转换荧光信号

仪器操作流程

连接电源，开启仪器，进行自检。

开机自检

新建实验，设置实验名称、类型等，保存并运行程序。

设置程序

离心试剂样本，放入反应管，启动PCR程序。

放置样品

仪器维护与校准

定期清洁外壳、样品槽及热盖

日常清洁维护

针对温度不稳等故障，及时检查并维修

故障排查处理

实时荧光PCR实验步骤

章节副标题

肆

样本准备与处理

01

RNA抽提

提取样品RNA，确保质量和纯度

02

cDNA合成

将RNA逆转录为cDNA，用于后续扩增

PCR反应体系配制

提取并选择合适浓度DNA作模板

加入引物、dNTPs、缓冲液及酶

模板DNA制备

反应组分添加

数据分析与结果解读

01

导入CT值

导入原始数据CT值，为分析基础。

02

计算相对定量

通过△CT、△△CT计算，得出2∧-△△CT值，评估目标基因表达水平。

实时荧光PCR的应用实例

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伍

病原体检测

利用实时荧光PCR技术快速诊断新冠病毒，提高检测灵敏度和特异性。

新冠病毒检测

01

采用实时荧光PCR法检测新型布尼亚病毒，适用于急性起病且症状不明显的患者。

布尼亚病毒筛查

02

基因表达分析

实时荧光PCR用于病原体检测，判断感染程度，辅助疾病诊断。

疾病诊断应用

01

通过定量分析遗传病相关基因，为遗传病的预测和诊断提供支持。

遗传病筛查

02

遗传性疾病诊断

实时荧光PCR快速检测基因突变，辅助遗传病诊断。

基因突变检测

通过扩增病原体基因序列，实现感染性疾病早期诊断。

病原体筛查

实时荧光PCR的挑战与展望

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陆

技术面临的挑战

需优化引物设计、退火温度等，以提高扩增效率。

反应条件优化

反应体系中可能存在PCR抑制物，影响结果准确性。

抑制物干扰

未来发展趋势

优化荧光探针与酶效，提升灵敏度和特异性，缩短检测时间。

提高检测效率

微流控技术普及，便携式、高通量PCR仪器提高样本处理速度。

便携式高通量

潜在应用领域拓展

利用实时荧光PCR技术，加速作物育种进程，提高生产效率。

农业精准育种

实时荧光PCR在肿瘤液态活检中，提高早筛灵敏度和准确性。

肿瘤早筛检测

谢谢

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