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草莓乙烯受体FaErs1基因克隆及RNAi植物表达载体构建：技术探索与应用前景

一、引言

1.1研究背景

草莓（FragariaananassaDuch.）作为蔷薇科草莓属的多年生草本植物，凭借其鲜美多汁的口感、丰富的营养价值，深受消费者喜爱，在全球水果市场中占据重要地位。在中国，草莓产业发展迅猛，已成为世界最大的草莓生产国，2022年种植面积达190.94万亩，产量高达336.4万吨，栽培面积和产量长期稳居世界首位。从地域分布来看，东北、黄淮海、长江中下游、西南和华南是我国五大草莓主产区，其中江苏省和山东省是最主要的供给大省，2022年江苏省种植面积占全国总种植面积14%，产量占全国的14.57%；山东省种植面积占全国总种植面积12.67%，产量占全国的18.23%。草莓产业不仅为农民脱贫致富发挥了积极推动作用，还促进了一二三产业融合发展，如天津市打造的蓝莓产业园区，形成了“龙头企业＋合作社＋家庭农场＋农户”的集群化发展模式；山东潍坊市潍城区的草莓产业以中高端产品销售和休闲采摘、农事体验为主，有力带动了村集体和村民“双增收”。

然而，草莓果实采后极易软化，不耐贮运，这严重影响了其商品价值。草莓属非跃变型果实，但其在成熟阶段会产生少量乙烯。研究表明，乙烯在草莓果实的成熟过程中发挥着重要的生理作用，它能够影响果实的色泽、硬度、香气等品质指标。乙烯的大量表达可能与受体基因FaErs1密切相关。乙烯通过与受体结合，启动一系列信号传导途径，进而调控果实的成熟进程。在草莓果实成熟阶段，乙烯的产生量逐渐增加，而FaErs1基因的表达水平也随之发生变化，这暗示着FaErs1基因在乙烯信号传导通路中扮演着关键角色。深入研究FaErs1基因功能，有助于揭示乙烯受体与非跃变型果实成熟的关系，从而为采用生物技术手段提高草莓果实的贮运性能奠定基础。传统的贮藏保鲜技术对草莓果实的保存时间有限，在运输贮藏过程中造成了很大的经济损失。因此，从基因层面探究草莓成熟机制，寻找有效的调控方法，对于延长草莓贮藏期、减少经济损失具有重要意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过克隆草莓乙烯受体FaErs1基因，并构建其RNAi植物表达载体，为深入解析草莓果实成熟的分子机制提供理论依据。通过对FaErs1基因的研究，能够进一步明确乙烯在草莓果实成熟过程中的作用机制，揭示乙烯受体与非跃变型果实成熟之间的内在联系。这不仅有助于丰富果实成熟的理论知识，还能为其他非跃变型果实的研究提供参考和借鉴。

在实践应用方面，本研究成果可为草莓品种改良和贮藏保鲜技术的创新提供技术支撑。通过调控FaErs1基因的表达，可以延缓草莓果实的成熟进程，降低果实的软化速度，减少果实的腐烂率，从而延长草莓的贮藏期和货架期，提高草莓的商品价值。这对于促进草莓产业的可持续发展，增加农民收入，满足消费者对优质草莓的需求具有重要的现实意义。此外，本研究中构建的RNAi植物表达载体，为后续的基因转化和功能验证提供了重要的工具，有助于推动草莓基因工程育种的发展。

1.3国内外研究现状

在国外，对草莓乙烯受体基因的研究开展较早，且取得了一系列重要成果。西班牙研究人员通过基因沉默技术（RNAi），证实NAC转录因子FaRIF（RipeningInducingFactor）对于八倍体栽培草莓的成熟至关重要。他们发现FaRIF-RNAi突变体显著推迟了草莓果实成熟进程，通过对其转录组分析，揭示了FaRIF参与果实成熟过程中细胞壁的重组、花青素等次生代谢产物的合成以及植物激素的调控等多条通路。此外，研究还发现乙烯在草莓果实成熟中存在器官特异性作用，且果实成熟与生长素、赤霉素、脱落酸等多种植物激素密切相关。在RNAi技术应用方面，国外已将其广泛应用于草莓基因功能研究，通过抑制特定基因的表达，深入探究基因在果实发育、品质形成等过程中的作用。

国内对于草莓乙烯受体基因的研究也在逐步深入。一些研究克隆了草莓乙烯受体基因，如FaEtr1、FaEtr2和FaErs1等，并对其序列特征和表达模式进行了分析。朱海生等分别克隆了草莓乙烯受体FaEtr1基因580bp部分特异序列和FaErs1基因445bp部分特异序列，并构建了反义表达载体。宋春丽等采用RNA干扰技术抑制草莓乙烯受体基因FaEtr2表达，以延缓草莓成熟软化进程。这些研究为进一步揭示草莓果实成熟的分子机制奠定了基础。然而，当前研究仍存在一些不足。对于草莓乙烯受体基因的功能研究还不够深入，特别是在基因调控网络和信号传导途径方面，仍有许多未知领域有待探索。RNAi技术在草莓中的应用还处于初级阶段，如何提高RNAi的效率和稳定性，