2025版《中国药典》高效液相色谱法检验操作规程 .pdfVIP

臣心一片磁针石，不指南方不肯休。——文天祥

一、目的：

高效液相色谱法检验操作规程

编写/修订人/日期年月日部门/姓名

审核人/日期年月日部门/姓名

批准人/日期年月日部门/姓名

执行日期2020年11月01日颁发部门品质部

分发部门品质部

制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。

二、范围：

本操作规程适用于高效液相色谱法的检验操作。

三、职责：

1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；

2、化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。

四、内容：

简述：高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对

供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱

内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1、对仪器的一般要求和色谱条件

高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱内径一般为2.1～4.6mm,填充剂粒径为2～10μm。超高效液相色谱仪是耐超高压、

小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

1.1色谱柱

1.1.1色谱柱的类型

1.1.1.1反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体

有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷

键合硅胶和苯基硅烷键合硅胶等。

1.1.1.2正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的

填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作

反相色谱。

1.1.1.3离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和

阴离子交换色谱柱。

1.1.1.4手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

1.1.2色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团

的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应

根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

1.1.3温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化

的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度。

1.1.4残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2～8之间。烷基硅烷带有

立体侧链保护、或残余硅羟基巳封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广

泛pH值的流动相，可用于pH值小于2或大于8的流动相。

1.2检测器

1.2.1最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检

测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、电雾式检测器、示差折光检测器、电化学检测器

古之立大事者，不惟有超世之才，亦必有坚忍不拔之志。——苏轼

和质谱检测器等。

1.2.2紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不

仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器、电雾式检测器和示差折光