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沙苑子黄酮对MCF

【摘要】目的研究沙苑子总黄酮(FAC)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用、诱导凋亡作用以及其对NF-кB表达作用影响。方法以不同浓度(，，，5mg/ml)处理MCF-7细胞6，12，24，48，72h后，SRB法测定细胞增殖抑制；FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测凋亡率变化；用Westernblot法检测NF-кB蛋白表达。结果SRB法显示，，mg/ml浓度沙苑子黄酮作用24，4872h以及mg/ml作用48，72h后MCF-7细胞增殖抑制作用与对照组相比差异具有显着性；5mg/ml作用48，72h后以及mg/ml作用24h后对MCF-7的增殖抑制作用与对照组相比也有差异性。FITC-AnnexinⅤ/PI双染法FCM检测显示，不同浓度沙苑子黄酮(，，，5mg/ml)作用72h后，MCF-7细胞早期凋亡率分别为%，%，%，%,晚期凋亡率分别为%，%，%，%。与对照组比较，，mg/ml组早、晚期凋亡率差异具有显着性，5mg/ml组的早、晚期凋亡率也有差异性，mg/ml剂量组的早、晚期凋亡率与5-Fu组比较差异无显着性。Westernblot检测NF-κB表达，再用BandLeader分析。结果，，/ml浓度组与对照组相比NF-кB表达减少差异具有显着性；5mg/ml组与对照组相比NF-кB表达也有差异性。结论沙苑子黄酮对MCF-7具有增殖抑制和诱导凋亡作用；其作用可能与其下调NF-кB表达有关。

【关键词】沙苑子总黄酮；MCF-7；NF-кB；5-Fu；凋亡

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，初氏［1］与石氏［2］对北京西城区近四年的居民疾病死因分析显示，居民死亡的第1位原因是恶性肿瘤，而乳腺癌居女性恶性肿瘤死亡原因的第3位。上海地区2002～2005年乳腺肿瘤是第1位死因。乳腺癌与其他恶性肿瘤一样，药物治疗不良反应比较严重，甚至有些癌症病人最后死于药物的不良反应而不是疾病本身。因此，寻找一种对乳腺癌有效，而不良反应比较小的药物是十分有意义的。中医中药是世界医药宝库中的瑰宝，有很多值得我们探讨研究，也是药物开发的不竭的宝库。前期研究显示，沙苑子黄酮对S180荷瘤小鼠以及H22荷瘤小鼠的肿瘤均有增殖抑制作用［3，4］。本文用SRB法研究MCF-7对沙苑子黄酮的敏感性；FITC-AnnexinⅤ/PI双染法FCM法研究沙苑子黄酮对MCF-7诱导凋亡作用；用Westernblot法检测NF-kB的表达，探讨沙苑子黄酮对人乳腺癌细胞株的作用，以期能为乳腺癌的治疗开辟一条新的途径。

1材料与仪器

药物沙苑总黄酮由苏州中药研究所顾振纶教授提供,比色法检测质量分数为80%。RPMI1640培养基、MEM培养基，Gibco产品；超级新生小牛血清，杭州四季青生物工程材料研究所生产。PMI1640培养基稀释成浓度为以mg/ml，4℃保存备用。

细胞株人乳腺癌细胞株MCF-7，购于中科院上海细胞生物研究所(中国上海)。

其它试剂FITC-AnnexinⅤ/PI双染试剂盒(Medsystems,Austria)；兔抗NF-κBp65多克隆抗体、批号为J119，购自SantaCruz公司；Biotinylated兔抗羊IgG自北京中山生购物技术有限公司；胰酶，AMRESO产品；胰岛素，上海第一生化药业有限公司生产；SRB,上海化学试制公司进口分装、L-谷氨酸、碘化丙啶，Sigma产品；十二烷基磺酸钠，上海化学试剂厂生产；其余试剂均为国产分析纯。

仪器

CO2孵箱，Napco5410型，美国Napco公司；倒置显微镜，XD-20型，重庆光学仪器厂产品；酶联免疫检测仪，DG3002型，国营华东电子管厂产品；流式细胞仪；电热恒温水浴锅，型，上海医疗器械厂产品；光栅分光光度计，722型，江苏科达智能仪器厂产品。

2方法

细胞培养用含10%FBS、200U/L胰岛素的MEM培养液于37℃、5%CO2条件下培养，3d传代。取对数生长期细胞进行实验。以1×106/ml的细胞浓度，分别接种于含FAC浓度为，，，5mg/ml的RPMI1640培养体系中,置于37℃、5%CO2条件下培养，24h后收集细胞，以1×PBS洗涤2次并重悬细胞,备用。

SRB法测定细胞活力［5，6］取生长期MCF-7细胞接种于96孔培养板中，调整细胞浓度为4×105/孔,次日进行分组。实验组分为不同浓度FAC，阴性对照组加入等体积培养液,阳性对照组加5-Fu，每组均设4个平行孔。分别置37℃、5%CO2条件下培养培养，分别于6，12，24，48，72h后每孔加入预冷的80%三氯醋