基因诊断介绍.pptVIP

个人遗传档案未来的社会,每人只要取一滴血就可以拥有一个遗传档案,从中可以进行各项基因预测.个人遗传档案的理想形式是:一块基因芯片.看病时,芯片插入电脑,决定了个性化的医疗方案.基因组多态性专利问题克林顿和布莱尔的声明:基因组顺序及其变异不能够申请基因专利.基因多态性和疾病以及特点生理功能相关能够申请专利.基因功能相关的SNP专利与cDNA专利相比,科学家与企业家的争议较少.这种具有明确功能的基因专利蕴藏着无限的商业契机.基因多态性的ELSI问题基因组顺序是个人的隐私,基因检测如何保护个人的基因隐私?基因组SNP与疾病的相关性是否会导致:上学,个人培养,就业,婚姻,保险等方面的问题.基因犯罪和基因讹诈,基因歧视基因组SNP研究是否会导致种族歧视和个人基因组歧视?如何立法保护?基因SNP研究是否会影响社会安全,法律(同性恋基因,犯罪基因,自杀基因)医学遗传检查的限制和结果的管理.PCR简介聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。PCR历史简介PCR的最早设想已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想.1985年美国PE-Cetus公司Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。最初采用DNA聚合酶I的Klenow片段;Keohanog改用T4DNA聚合酶;1988年Saiki等从温泉中分离嗜热杆菌(thermusaquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶。PCR基本原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①变性：模板DNA经加热至93℃，双链变性为单链.②退火(复性)：变性后的单链模板DNA,温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链.重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的半保留复制链，而且这种新链又成为下次循环的模板。2～3小时就能将目的基因放大几百万倍。PCR反应体系与反应条件

10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物(2种)各10～100pmol模板DNA0.01～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加双或三蒸水至100ul*该体系总体积可以减少至5.0ul.PCR反应要素--引物引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板,设计引物应遵循以下原则：①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。②扩增长度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③碱基比：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3端的互补(引物二聚体，非特异条带)。⑤引物3‘端的碱基，特别是倒数第一,二个碱基，应严格配对。⑥引物与酶切位点.⑦引物的特异性：引物应与DNA数据库的序列无明显同源性。8.引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，二聚体。PCR反应要素--酶和dNTP酶:2.5U/100ul，过高引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。dNTP:dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP易变性。dNTP使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1MTrisHCL将PH调节到7.0～7.5，分装冻存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNT