实验九微生物的生理生化反应.pptVIP

实验九微生物的生理生化反应;一、实验目的

通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。

;二、实验原理;糖发酵实验

细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油)的能力有很大的差异。有些细菌发酵某种糖后产生各种有机酸(如乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸)及各种气体(如氢、甲烷、二氧化碳)。有的细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来指示。在配制培养基时可预先加入溴甲酚紫(pH5(黄)－pH7(紫))。当细菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由糖发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。;;;糖发酵试验;IMViC反应：

吲哚实验：

甲基红实验

V.P.实验

柠檬酸盐实验

H2S实验;吲哚试验:检查吲哚的产生

有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。;甲基红试验：检查微生物利用葡萄糖产酸的情况

细菌代谢糖产生的有机酸会使培养基变酸，可通过加入的甲基红指示剂（PH6.3橘黄色-PH4.2红色）。尽管所用的肠道菌都能发酵葡萄糖产生有机酸，大肠杆菌和产气杆菌在培养早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性PH4.0，而产气杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇，丙酮酸等。;甲基红试验;伏-普试验：测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的情况。

某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色的化合物，即V.P.反应阳性。;VP试

验;柠檬酸盐试验：检测柠檬酸盐是否被利用;硫化氢试验：检测硫化氢的产生

有些细菌能分解含硫的有机物，如胱氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢一遇到培养基中的铅盐或铁盐等，就形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀物。;动力观察：;;三、实验器材;四、实验内容;2.培养37℃24-48h

3.结果观察：

①吲哚试验：1ml乙醚萃取???剧烈摇晃静置分层，沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。

②M.R试验：加入2滴甲基红试剂，阳性为红色。

③VP试验:加40％KOH约10滴，再加等量5％α－奈酚,酒精灯加热，阳性红色。

④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。

⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色;产气，杜氏小管中有气泡。

⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。;;思考题;上次实验习题解答;2、如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明实验方案。

①配制酪素平板；

②接种适当的稀释液；

③筛选产透明圈的细菌；

④接种液体培养基培养；

⑤取培养液上清（含细菌分泌的蛋白酶），检测其在高温下蛋白酶是否有活力。;人有了知识，就会具备各种分析能力，

明辨是非的能力。

所以我们要勤恳读书，广泛阅读，

古人说“书中自有黄金屋。

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