2025年板电泳分析小麦幼苗过氧化物酶同工酶(实验报告) .pdfVIP

百川东到海，何时复西归?少壮不努力，老大徒伤悲。——汉乐府

实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析⼩麦幼苗过氧化物

酶同⼯酶（实验报告）

⽣物化学实验报告

实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析

⼩麦幼苗过氧化物酶同⼯酶

⼀、研究背景及⽬的

电泳现象就是带电粒⼦在电场中向与其⾃⾝带相反电荷的电极泳动。电泳技术最初是由瑞典的著名科学家Tisellius所奠基，⾃

此⽣物⼤分⼦的分离纯化便进⼊了电泳技术的新纪元。电泳技术的发明是⼈们在分离纯化技术中的差异转换“”思路上⼜⼀次伟

⼤的飞跃。⼈们清楚地意识到，要想使⽬标物得到分离，⽬标物与杂质之间的性质差异必须⾜够⼤，这⼜与某些性质差异⼩的

物质的分离相⽭盾，⽽⼈为放⼤这些差异⼩的性质必然会破坏⽬标物的原有结构，因此需要借助第三者进⾏差异转化，即以其

⾃⾝的性质为基础，转化为其他⽅⾯差异⼤的性质。电泳技术就是利⽤⼀些⽣物⼤分⼦的电性特点，在⼀定的条件下使被分离

物之间很⼩的差异转化为⾃⾝所带电荷性质与数量的差异，在外加电场的作⽤下便会体现出迁移⽅向及速度上的差异，通过时

间上的积累进⽽体现为迁移距离的差异。最初的电泳技术是在溶液中进⾏的⾃由电泳，后来⼈们想到，由于待分离物的⼤⼩、

形状也存在差异，那么它们在电场中泳动的过程中必然会受到不同的阻⼒，这种阻⼒的差异⼜转化为了电场中迁移速度的差

异，所以⼈们便发明了各种⽤于电泳的载体（⽀持介质），使分⼦的⼤⼩及形状差异得以转化和体现，⼤⼤提⾼了分辨率。⾄

此，电泳技术的基本理论就建⽴了。此后，在实际操作中，⼈们不断进⾏探索、改进与完善，发明了诸多的电泳新技术，使电

泳成为⼀项⽣物⼤分⼦分离纯化中令⼈瞩⽬的研究技术。

本实验基于电泳的基本原理对⼩麦过氧化物酶同⼯酶进⾏分离，旨在学习并掌握电泳技术的发明历程以及操作过程中的相关细

节，同时更为深刻地理解⼀项新技术在实际应⽤中不断修正与完善的过程，体会电泳和层析两⼤技术各⾃的特点和优势。

⼆、原理[1]

1.过氧化物酶同⼯酶

同⼯酶是催化同⼀种化学反应，但其酶蛋⽩本⾝的分⼦结构组成却有所不同的⼀组酶。它们与⽣物的遗传、⽣长发育、代谢调

节及抗性等都有⼀定关系，测定同⼯酶在理论上和实践上都具有重要的意义。本实验测定的过氧化物酶同⼯酶是植物体内普遍

存在的、活性较⾼的⼀种酶，它与植物的光合、呼吸作⽤以及⽣长素的氧化等有关；在植物⽣长发育过程中它的活性不断发⽣

变化。因此，测定过氧化物酶同⼯酶的⽣物活性可以了解某⼀时期植物体内代谢的变化。

2.电泳的基本原理

带电粒⼦在电场中的泳动速度有以下公式：

v=

由此可以看出，粒⼦移动的速度（v）与电场强度（E）和粒⼦所带电量成正⽐，⽽与粒⼦的⼤⼩（γ）和溶液的粘度（η）成

反⽐。此外，粒⼦的移动速度还与形状有关，即⾮球形粒⼦（如线形DNA分⼦）在电泳中会受到更⼤的阻⼒。

不同带电颗粒在同⼀电场中泳动的速度不同，为了便于⽐较，常⽤泳动度或迁移率（m）来表⽰，迁移率是指带电颗粒在单位

电场强度下泳动的速度。其数学表达式如下：

m==

由上式可以看出，迁移率m仅与带电粒⼦所带电荷的数量、粒⼦⼤⼩及形状和溶液粘度有关，⽽与电场强度⽆关。

⼜因为氨基酸、蛋⽩质、酶等的电离度α随着溶液pH的变化⽽变化，所以在实际点臃肿，常使⽤有效迁移率这个概念，有效迁

移率（µ）定义为迁移率（m）和当时条件下电离度α的乘积。即：

µ=m·α=

3.聚丙烯酰胺凝胶的形成及特点

这种凝胶是以丙烯酰胺单体（Acrylamide，简写为Acr）和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺（N，N-MethylenaBisacrylamide，

简写为Bis）在催化剂的作⽤下聚合⽽成的。

Acr和Bis在它们单独存在或混合在⼀起时是稳定的，且具有神经毒性，操作时应避免接触⽪肤。但在具有⾃由基团体系时，它

们聚合。引发产⽣⾃由基团的⽅法有两种，即化学法和光化学法。

化学聚合的引发剂是过硫酸铵（NH4）2S2O3（Ammoniumpersulfate，简写为Ap），催化剂是N，N，N，N-四甲基⼄⼆胺

其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。——《论语》

（Tetramethylenediamine，简写为TEMED）。在催化剂TEMED的作⽤下，由过硫酸铵（Ap）形成的⾃由基⼜使单体形成⾃

由基，从⽽引起聚合作⽤。TEMED在低pH时失效，会使聚合作⽤延迟；冷却也可使聚合速度变慢；⼀些⾦属抑制聚合；分⼦

氧阻⽌链的延长，防碍聚合作⽤。这些因素在实际操作时都应予以控制。

4.凝胶系统及特点

本实验采⽤不连续的