NAP染色梁红梅48课件.pptxVIP

NAP染色主讲人：梁红梅

NAP染色概述一实验步骤二结果判断三目录学习内容临床应用四

实验原理中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色偶氮偶联法：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶在pH9.6左右的碱性环境中，能水解基质液中的磷酸萘酚钠底物，释放出萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶活性所在之处。不同的底物与重氮盐的组合不同，其阳性反应物质的颜色可有不同，但其化学反应过程基本相似。NAP是一种酶，主要存在于成熟中性粒细胞胞质中（中性杆状核粒细胞/中性分叶核粒细胞），在碱性条件下，能分解磷酸酯。

新鲜干燥涂片用冷10%甲醛甲醇固定液30s，流水轻轻冲洗30-60s，待干。涂片浸入基质孵育液中，在37℃温育10—15min，流水冲洗1-2min。置苏木素染色液中复染5-8min，流水冲洗待干。观察100个成熟中性粒细胞的染色结果，报告阳性率和积分值。实验操作流程操作过程

结果判断胞质中出现紫黑色或棕红色颗粒为阳性实验结果细胞染色0分（－）胞质中无阳性反应颗粒1分（+）胞质中含少量阳性反应颗粒或胞质呈弥漫灰色2分（++）胞质中含中等量阳性颗粒或胞质呈弥漫灰黑色3分（+++）胞质中含较多阳性反应颗粒或胞质呈弥漫棕黑色4分（++++）胞质中充满粗大阳性反应颗粒甚至可遮盖细胞核或胞质呈弥漫深黑色

成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分值的计算具体计算过程如下：N（100）=N1（—）+N2（+）+N3（++）+N4（+++）+N5（++++）积分值=N1×0+N2×1+N3×2+N4×3+N5×4血涂片经染色后，在油镜下，连续观察100个成熟中性粒细胞，记录其阳性反应细胞所占百分率即为阳性率；并对所有阳性反应细胞逐个按其反应强度作出（+）～（++++）的分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值。结果以阳性率和积分值来表示。

中性粒细胞碱性磷酸酶染色1.中性成熟粒细胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；4.中性成熟粒细胞（++++）；5.淋巴细胞（-）

NAP新生儿NAP活性增加，以后下降。儿童各年龄大致相似，成人较儿童活性减低，老年人更低。年龄变化应激状态下的变化紧张、恐惧、剧烈运动等NAP活性可增加。月经周期中的变化经前期增高，行经后降低，经后期恢复。妊娠期的变化妊娠2-3个月的NAP积分轻度升高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后恢复正常。生理变化

慢性粒细胞白血病细菌性感染再生障碍性贫血急性淋巴细胞白血病恶性淋巴瘤真性红细胞增多症原发性血小板增多症类白血病反应病毒性感染阵发性睡眠性血红蛋白尿症急性粒细胞白血病恶性组织细胞病继发性红细胞增多症继发性血小板增多症ABCDEFG疾病的鉴别

NAP↑类白血病反应、慢性中性粒细胞白血病、细菌性感染、再生障碍性贫血

急性淋巴细胞白血病常增加、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症NAP↓见于慢性粒细胞白血病慢性期、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、恶性组织细胞病等。病理变化

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