T_ZBXH 142-2025 甜菜根腐病镰刀菌分子检测与鉴定技术规程.docxVIP

ICS65.020.20CCSB15

ZBXH

新疆维吾尔自治区植物保护学会团体标准

T/ZBXH142—2025

甜菜根腐病镰刀菌分子检测与鉴定技术规

程

Technicalcodeofpracticeformoleculardetectionandidentificationoffusariumspp.

ofsugarbeetrootrot

2025-9-20发布2025-9-27实施

新疆维吾尔自治区植物保护学会发布

I

T/ZBXH142—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件中某些内容可能涉及相关知识产权保护内容，本文件的发布机构不承担相关识别等责任。本文件由新疆维吾尔自治区农业科学院植物保护研究所提出。

本文件由新疆维吾尔自治区植物保护学会归口。

本文件由新疆维吾尔自治区农业科学院植物保护研究所、中国农业大学起草。

本文件主要起草人：杨安沛，吴学宏，李广阔，张航，韩成贵，白微微，赵灿，曹禹，丁瑞丰，郝志刚，席欧彦，阿勒合斯?加尔得木拉提。

本文件适用于新疆维吾尔自治区内所有相关单位及组织，自愿采用。

本文件由采用本标准的单位及组织自行承担相关责任。

本文件由新疆维吾尔自治区植物保护学会负责解释。

本文件为首次公布。

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甜菜根腐病镰刀菌分子检测与鉴定技术规程

1范围

本文件本文件规定了甜菜根腐病镰刀菌分子检测与鉴定的程序和方法。

本文件适用于甜菜根腐病镰刀菌的分子检测与鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/T2589植物病原真菌检测规范。

3术语和定义

3.1

甜菜根腐病Sugarbeetrootrot

由真菌或细菌侵染甜菜引起块根腐烂的一类根病的总称。

3.2

甜菜根腐病镰刀菌SugarbeetrootrotFusarium

引起甜菜根腐病的镰刀菌属病原菌，其种类有Fusariumoxysporum、F.equiseti、F.solani、F.proliferatum、F.tricinctum、F.redolens、F.brachygibbosum、F.verticillioides、F.graminearum、F.nygamai、F.culmorum等11种。

3.3

分子鉴定Molecularidentification

利用核酸技术对生物中细胞核或非核区特异性的DNA或RNA进行序列比较，从而区分生物的不同种属。

4样品采集、分离、纯化和保存

4,1样品采集

在甜菜种植区域采集疑似根腐病的甜菜病样，症状见附录A，记录采集时间和地点。

4.2分离

甜菜根腐病菌分离方法见附录B。

4.3纯化和保存

采用单孢分离法对分离得到的镰刀菌进行纯化和保存（见附录B）。

5病原菌鉴定

5.1形态学鉴定

对纯化后的镰刀菌在25℃培养4d后的菌落直径、菌落颜色、产生色素颜色、大、小型分生孢子的大小及分隔情况、厚垣孢子的有无等几个方面进行形态学观察鉴定（见附录C）。

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5.2分子鉴定

采用真菌通用引物ITS1/ITS4对镰刀菌rDNA-ITS区域以及针对镰刀菌保守基因设计的引物EF1/EF2对镰刀菌EF-1α区域进行PCR扩增(见附录D)。将扩增产物连接后测序，测序结果在NCBI和FusariumMLST数据库中进行BLAST比对分析，确定镰刀菌的种类。

6病原菌致病性测定

6.1甜菜植株培育

选取在温室中生长6周后长势一致的甜菜植株用于致病性试验（见附录B）。

6.2病原菌回接、验证

6.2.1镰刀菌孢子悬浮液制备

镰刀菌孢子悬浮液制备方法见附录B。

6.2.2浸根接种

浸根接种方法见附录B。

6.2.3病原再分离及验证

病原再分离及验证方法见附录B。

7结果判定

与附录C描述的菌落及孢子等形态相似的分离物可初步判定是否为镰刀菌属。病原菌的ITS和EF-1α基因扩增产物与目的片段大小一致，且测序结果与数据库中镰刀菌的一致性超过99%，可判定镰刀菌的具体种类（见附录D）。

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附录A

（资料性）

甜菜根腐病症状

主要症状表现