红细胞血型检测.pptVIP

临床应用DAT：胎母血型不合新生儿溶血病的诊断、免疫溶血性输血反应的调查、自身免疫性溶血性贫血的诊断及药物诱发型溶血病的诊断IAT：血型鉴定、交叉配血、器官移植、妊娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血型抗体的检出和鉴定第28页，共43页。第六节微柱凝胶介质试验技术第29页，共43页。重点提示实验原理适用范围优点第30页，共43页。实验原理分子筛技术和免疫学技术相结合的产物游离红细胞和凝集红细胞是否能通过特殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红细胞得以分离阴性反应离心力作用下，未与抗体结合的游离红细胞因体积小通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣”阳性反应与特异性抗体结合的红细胞因体积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的顶部或悬浮于凝胶中第31页，共43页。红细胞血型检测第1页，共43页。（优选）红细胞血型检测第2页，共43页。目录第七节吸收放散试验技术第八节凝集抑制试验技术第九节红细胞血型分子生物学检测第3页，共43页。第一节输血前免疫血液学检查第4页，共43页。重点提示ABO血型和RhD血型鉴定不规则抗体的筛查和鉴定交叉配血试验第5页，共43页。ABO血型和RhD血型鉴定原理：利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反应来完成。ABO血型鉴定：正定型、反定型。正定型，检测红细胞表面是否存在A抗原和(或)B抗原；反定型，检测血清中是否存在抗-A／抗-B抗体（凝集素）。RhD血型鉴定：红细胞上存在D抗原时，可与抗-D分型血清产生特异性的抗原抗体反应，出现红细胞凝集为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。第6页，共43页。不规则抗体的筛查和鉴定不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即抗-A、抗-B之外的血型抗体ABO系统中的亚型，变异型的抗-A1或某种抗-B等抗体包括同种抗体和自身抗体实验方法：盐水介质法、白蛋白介质法、低离子强度介质法(LISS)、酶技术、抗球蛋白试验、凝聚胺(polybrene)促凝技术和凝胶试验（Geltest）等第7页，共43页。交叉配血试验1.主侧交叉配血：受血者血清(浆)与供者红细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。2.次侧交叉配血：受血者红细胞与供者血清(浆)反应，检测供者血液中是否存在针对受血者红细胞的抗体。3.自身对照：受血者红细胞与自身血清(浆)反应，以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果的因素。第8页，共43页。第二节盐水介质试验技术第9页，共43页。重点提示实验原理实验方法结果判读第10页，共43页。实验原理在盐水介质（salinemedium）中，IgM类天然抗体分子链较长可直接与含有相应抗原的红细胞结合，并呈现肉眼可见的凝集。仅能检出IgM类抗体，无法检出IgG类抗体。第11页，共43页。实验方法平板法应用于常规ABO血型和RhD抗原定型，易出现假阳性或假阴性结果。试管法定型试验或半定量试验，如测定抗体效价，结果准确、可靠。第12页，共43页。结果判读阳性结果红细胞出现凝集反应或溶血阴性结果红细胞呈游离的混悬状态溶血阳性结果第13页，共43页。第三节酶介质试验技术第14页，共43页。重点提示实验原理实验方法第15页，共43页。实验原理作用于红细胞表面的多糖链，减少红细胞表面负电荷，缩短细胞间距，增强IgG抗体与红细胞表面抗原的凝集反应改变红细胞表面结构，暴露出某些隐蔽抗原，使IgG类不完全抗体可以与酶处理的红细胞在盐水介质中发生凝集反应第16页，共43页。实验原理常用：木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶Rh、Kidd血型系统的检出效果最好对M、N、S、s、Fya、Fyb抗原破坏较显著第17页，共43页。实验方法一步法在血清和红细胞反应体系中直接加入酶液促进抗体与相应红细胞反应，敏感性较差二步法用酶液消化红细胞后，洗涤去净酶液，增强红细胞抗原性，使不完全抗体与之发生反应，出现特异性凝集第18页，共43页。结果判读阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管出现凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。阳性对照管不凝集或（和）阴性对照管出现凝集，试验失败。分析原因，重新试验。第19页，共43页。第四节凝聚胺介质试验技术第20页，共43页。重点提示实验原理实验方法第21页，共43页。实验原理凝聚胺是一种高价阳离子季铵盐多聚物，可中和红细胞表面的负电荷，引起正常红细胞可逆性的非特异性聚集。加入柠檬酸重悬液(中和液)后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集会因电荷中和而