药物的含量测定2讲课文档.pptVIP

第三节分光光度法分光光度法:是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。光是电磁波,常用的波长范围为：(1)200～400nm----紫外光区；(2)400～760nm----可见光区；(3)760～2500nm（12800cm-1～4000cm-1）----近红外光区(4)2.5～25μm（按波数计为4000cm-1～400cm-1）----红外光区。第27页，共67页。紫外可见分光度法方法特点与适用范围1、简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及2、灵敏度高：本法灵敏度可达10-7~10-4g/ml，适用于低浓度试样分析3、准确度较高：本法误差在2%~5%之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品4、专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。本法比较少应用于原料药的含量测定，可用于制剂的含量测定，更多的应用于生物制剂的定量检查本法紫外区须选用石英比色皿，比色皿一般为1cm，吸光度在0.3~0.7之间为宜，选用最大吸收光波长。第28页，共67页。紫外-可见分光光度法物质吸收紫外和可见光区的电磁波产生的吸收光谱进行定性和定量分析的方法1.基本原理：朗伯─比耳定律A为吸收度；T为透光率；L为液层厚度，单位为cm；E为吸收系数，常用的是百分吸收系数和摩尔吸收系数表示；C为100ml溶液中所含被测物质的量g第29页，共67页。吸收系数%1110cmEM·=e摩尔吸收系数(ε)溶液浓度液层厚度百分吸收系数溶液浓度液层厚度第30页，共67页。2.仪器的基本结构钨灯（6～12V），产生320～3200nm的连续光谱，其适宜的波长是360～1000nm。氢灯发射150～400nm波长的光，适用于200～400nm波长。光源单色器吸收池检测器数据记录处理第31页，共67页。（2）吸收度的准确度吸收度的准确性用基准重铬酸钾硫酸溶液检定60mgk2Cr2O7,释稀1000ml，在规定波长处测定吸收度，计算吸收系数E，相对误差度在±1%以内。（3）分辨率测定波长(nm)235(min)257(max)235(min)235(max)吸收系数-E124.5144.048.6106.6（1）波长的准确度3.仪器的校正和检定第32页，共67页。《中国药典》2010版对吸光度的测定做了以下要求：（1）溶剂：要求：能溶解样品，挥发性小，对光波吸收少。溶剂吸收度（以空气为空白）在220-240nmA＜0.4在241-250nmA＜0.20在251-300nmA＜0.1300nm以上A＜0.054.吸光度的测定第33页，共67页。（2）空白试验校正：采用空白对照，将溶剂装入吸收池，放入光路调节，仪器使吸收度为0（或透光率100%），然后再测样品。（3）测定波长的核对：为了提高测定灵敏度，减少测定误差，吸收度一般应在测定，测定样品的与文献记载对照，应在规定波长±2nm以内。（4）供试品溶液的浓度：为了减少误差，应考虑使吸光度在0.3～0.7范围内第34页，共67页。（１）对照品比较法：（２）吸收系数法：（３）标准曲线法：5.含量测定：第35页，共67页。(1)对照法供试品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度供试品溶液的浓度对照品溶液的浓度第36页，共67页。(2)吸收系数法计算第37页，共67页。(3)标准曲线法配制系列浓度的对照品溶液，在λmax处测吸收度A，做吸光度—浓度曲线，测试样品时，根据A在标准工作曲线上查C。第38页，共67页。（1）空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。（2）测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池。（3）在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损），放入样品室每次方向应一致。（4）取吸收池时，应拿