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演讲人：日期:检验科甲型流感检测实验操作流程

CATALOGUE目录01检测前准备02样本采集规范03样本处理步骤04检测操作流程05结果判读标准06检测后处理

01检测前准备

核对试剂盒外包装是否完好无损，检查内部分装管、反应板、冻干试剂等组件是否齐全且无泄漏或污染迹象，确保试剂未过期且储存条件符合要求。试剂盒完整性验证根据实验需求准备足量无菌吸头、离心管、PCR反应管等耗材，确保其规格与检测仪器兼容，避免因耗材不匹配导致实验误差或设备故障。耗材匹配性确认确认对照品包装密封性良好，溶液无沉淀或浑浊现象，确保对照品在有效期内且储存温度符合说明书要求，以保证检测结果的可控性。阴性/阳性对照品检查010203试剂盒与耗材检查

使用75%乙醇或专用消毒剂对生物安全柜内壁、台面及外表面进行彻底擦拭，开启紫外线灯照射至少30分钟以灭活潜在病原体，确保操作空间无菌。实验环境消毒生物安全柜消毒采用含氯消毒剂或过氧化氢溶液对离心机、移液器、振荡器等高频接触设备表面进行喷洒或擦拭，重点处理样本接触区域，降低交叉污染风险。实验室台面与设备消毒确认实验室通风系统正常运行，HEPA过滤器无堵塞，定期监测空气洁净度指标，确保环境符合生物安全二级（BSL-2）标准。空气净化系统检查

个人防护装备穿戴三级防护标准执行依次穿戴医用防护口罩、护目镜或面屏、连体防护服、双层手套及鞋套，确保所有皮肤无暴露，防护服袖口需严密包裹手套边缘，避免样本接触风险。防护装备气密性测试佩戴完成后进行伸展动作测试，检查防护服是否出现撕裂或缝隙，护目镜与面部贴合度是否良好，必要时使用胶带加固易松动部位。手卫生规范操作在穿戴防护装备前及过程中，严格遵循七步洗手法，使用含酒精速干手消毒剂或抗菌皂液清洁双手，每步揉搓时间不少于15秒，确保手部无病原体残留。

02样本采集规范

鼻咽拭子采集方法确保采样人员佩戴N95口罩、护目镜、手套及防护服，使用无菌聚酯纤维拭子，避免样本污染。采样前需核对患者信息并解释操作流程，减少患者紧张情绪。采样前准备将拭子沿鼻腔底部平行插入鼻咽部，旋转3-5秒后缓慢退出，避免触碰口腔或鼻腔其他部位。若遇阻力需调整角度，确保采集到足够的上皮细胞。规范采样动作采样后立即将拭子头折断放入含病毒保存液的运输管中，拧紧管盖并检查密封性，防止液体泄漏或干燥导致病毒失活。样本处理注意事项

唯一标识要求若样本需暂存，应置于2-8℃冰箱冷藏，保存时间不超过72小时。避免反复冻融，防止病毒核酸降解影响检测准确性。短期保存条件长期保存规范需冷冻的样本应分装至冻存管，标注冻存批次号，存放于-70℃超低温冰箱，并建立样本库电子台账便于追溯。采用条形码或二维码标签标注患者ID、采样时间及检测项目，禁止手写标记以避免信息模糊或错误。标签需粘贴于运输管侧面，避开管盖接口处。样本标记与保存

生物安全转运要求三级包装系统样本需采用“主容器-吸附材料-次级容器”的包装方式，主容器为密封螺旋盖塑料管，次级容器为防漏生物安全袋，外层为专用转运箱并贴生物危害标识。交接流程规范转运人员需持生物安全培训合格证，与接收实验室双人核对样本数量、包装完整性及温度记录数据，填写交接单并双方签字确认。温度监控措施转运过程中使用温度记录仪实时监控冷藏箱内温度，确保全程维持在2-8℃范围内。若使用干冰运输，需避免直接接触样本管导致冻裂。

03样本处理步骤

拭子浸提液混合010203无菌操作规范在生物安全柜内打开采样管，将拭子头部完全浸入病毒保存液中，沿管壁反复挤压旋转至少10次，确保病毒颗粒充分释放至液体中。液体体积控制严格按比例添加裂解缓冲液（通常为1:1），避免过量稀释导致检测灵敏度下降，或液体不足影响后续核酸提取效率。静置时间控制混合后室温静置5分钟，使病毒衣壳充分裂解，但不得超过规定时间以防RNA降解。

离心与上清液提取离心参数设置使用预冷离心机（4℃），以3000rpm离心15分钟，确保细胞碎片和杂质沉淀彻底，同时避免高速离心导致病毒RNA断裂。上清液转移技巧用200μl微量移液器吸取上清液时，枪头需始终低于液面缓慢吸取，避免触及管底沉淀或产生气泡影响后续检测准确性。分装前质量控制通过紫外分光光度计检测上清液OD260/280比值，确保RNA纯度在1.8-2.0范围内，若出现蛋白污染需重新纯化样本。

样本分装注意事项分装容器选择使用无RNase的0.2ml离心管，管壁需标注唯一编号，避免使用易产生静电的材质导致微量样本吸附损失。低温保存规范分装过程中每处理一个样本更换手套，工作台面每批次用0.1%DEPC水擦拭，并开启紫外灯进行台面灭菌处理。分装后立即置于-80℃超低温冰箱，每管体积建议为50μl以满足单次检测需求，避免反复冻融导致病毒核酸降解。防交叉污染措施

04检测操作流程

加样量与技术要点每批次检测必须平行加