3.1.2DNA的粗提取与鉴定 高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

第3章基因工程高中生物学|人教版（2019）|选择性必修3·生物技术与工程第1节重组DNA技术的基本工具第2课时DNA的粗提取和鉴定

目录CONTENTS限制性内切核酸酶——“分子手术刀”1DNA连接酶——“分子缝合针”2基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”3【探究·实践】DNA的粗提取与鉴定4

四、DNA的粗提取与鉴定实验原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。①DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。②DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。1、提取DNA的原理2、鉴定DNA的原理

四、DNA的粗提取与鉴定目的要求①材料：新鲜洋葱（也可以选择香蕉、菠菜、菜花或猪肝等作为实验材料，提取DNA的方法可能稍有不同）、研磨液、体积分数为95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂和蒸馏水等。②用具：烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、试管、试管架、试管夹、酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、刀片和天平等。①了解DNA的物理和化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。②学会DNA粗提取的方法以及用二苯胺试剂对DNA进行鉴定。材料用具不同的实验材料，其DNA的含量有所差别，香蕉、草莓、鱼白等材料的DNA含量较高。

四、DNA的粗提取与鉴定材料用具①研磨液：②体积分数为95%的酒精：③2mol/L的NaCl溶液：④二苯胺试剂：⑤蒸馏水：破坏细胞，释放出细胞内的物质析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L，从而析出DNA各种试剂的作用：

破碎细胞过滤析出DNA鉴定DNA称取洋葱，切碎，放入研钵，倒入研磨液，充分研磨。研磨液的配方四、DNA的粗提取与鉴定方法步骤拓展本实验处理植物材料的研磨液中含有SDS（十二烷基硫酸钠），EDTA（乙二胺四乙酸）、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等试剂。在这个复杂的溶液体系中DNA可溶解；其中SDS可使蛋白质变性与DNA分离；EDTA是一种DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA；Tris提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。

破碎细胞过滤析出DNA鉴定DNA在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取上清液；或将研磨液倒入塑料离心管中离心取上清液。四、DNA的粗提取与鉴定方法步骤思考问题1:过滤能否用滤纸代替纱布？不可以。因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失，影响最终提取的DNA量。问题2:此步骤获得的上清液中可能含有哪些细胞成分？可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。称取洋葱，切碎，放入研钵，倒入研磨液，充分研磨。

破碎细胞过滤析出DNA鉴定DNA四、DNA的粗提取与鉴定方法步骤思考问题3：酒精预冷的作用？在上清液中加入体积相等的预冷的酒精溶液,静置2~3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，卷起丝状物；或将溶液倒入塑料离心管中离心，取沉淀物晾干。①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温可以降低DNA的溶解度，使其更容易从溶液中沉淀出来，便于后续的离心分离等操作，提高DNA的提取效率。④低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。

破碎细胞过滤析出DNA鉴定DNA四、DNA的粗提取与鉴定方法步骤将丝状物或沉淀物溶于2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min实验组对照组水浴加热空白对照：在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。评价结果：（1）DNA纯度：看提取物颜色（2）DNA的量：看与二苯胺反应颜色的深浅

四、DNA的粗提取与鉴定结果分析与评价（1）你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。（2）你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？

四、DNA的粗提取与鉴定

随堂检测5.下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（）A．实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低B．利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离D