2025年几种测蛋白含量方法的比较 .pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

几种测蛋白含量方法的比拟

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天将降大任于斯人也，必先苦其心志，劳其筋骨，饿其体肤，空乏其身，行拂乱其所为。——《孟子》

蛋白质含量测定方法的比拟及肽含量的测定

〔一〕蛋白质测定方法的比拟〔原理、优缺点〕

蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法〔Lowry法〕

和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫

外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，

往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考

虑：〔1〕实验测定要求的灵敏度和精确度；〔2〕蛋白质的性质；〔3〕溶液中存在

的干扰物质；〔4〕测定花费时间。蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲

法、福林酚法〔Lowry法〕和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和

福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以

上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准

蛋白质。在选择方法时应该考虑：〔1〕实验测定要求的灵敏度和精确度；〔2〕蛋

白质的性质；〔3〕溶液中存在的干扰物质；〔4〕测定花费时间。

1微量凯氏定氮法〔GB5009.5-2021〕

1.1原理样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨〔消化〕，氨又与硫酸作

用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据

此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

1.2操作方法样品经前处理、炭化、消化、蒸馏、滴定等主要步骤

1.3特点准确度较高，适用于0.2~1.0mg氮，误差为±2％；操作复杂费时，

整个过程需要耗时8~10h，试剂消耗量大。，测得结果为总氮含量，包括蛋白氮

和非蛋白氮含量；适用范围广，几乎所有样品均可用此方法。

2双缩脲比色法

2.1原理双缩脲法是利用蛋白质的双缩脲反响而测定蛋白质含量的方法。因蛋

白质含有两个以上的肽键，所以有双缩脲反响。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形

成紫红色络合物，在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时

反响，并于540~560nm测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品

的蛋白质浓度。其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及

氨基酸成分无关。

臣心一片磁针石，不指南方不肯休。——文天祥

2.2操作方法标准蛋白溶液或样液直接加双缩脲试剂反响30min，即可测定。

先绘制标准曲线，再测定样品

2.3特点灵敏度低1～20mg，20~30分钟操作简便、呈色稳定性好、试剂单

一；测定结果与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关；

灵敏度不高，约为1mg，双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋

白质测定。

3福林酚法〔Lowry法〕

3.1原理蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此

复合物使酚试剂的磷钼酸复原，产生蓝色化合物，在一定条件下，利用蓝色深

浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。该化合物

在750nm有最大吸收峰。

3.2操作方法测定依次加福林酚甲液、乙液后可见光度计750nm测定；先绘制

标准曲线、再测定样品。

3.3特点试剂配制略麻烦，但试