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第十二章固相膜免疫测定
第一节概述
固相膜免疫测定以微孔膜作为固相。固相膜的特点在于其多孔性、非共价键高度吸附抗体或抗原和易
于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。标记物
可用酶或各种有色微粒子，如彩色胶乳、胶体金或胶体硒等。
一、常用的固相膜
固相膜免疫测定中常用的膜为硝酸纤维素（NC）膜以及玻璃纤维素（fiberglass）膜、尼龙（nylon）
膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜等。其中最常用为NC膜。
二、固相膜的技术要求
1.孔径：用于穿流法的膜一般选择0.4μm左右，用于横流法的膜可选择5～10μm。
2.流速：孔径大，流速快。
2
3.蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm表示。
4.均一性：优质的膜应具有良好的均一性，这样才能保证试剂批内的均一性。
第二节免疫金标记技术
利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志
物在相应的配体处大量时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。这
一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（IGSS）。
一、胶体金的
（一）原理：一般采用还原法，常用的还原剂有枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。
向金溶液内加入还原剂，使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶。
（二）技术要点：金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也
随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化，这就是金溶胶用于免疫沉淀或免疫凝集试验的基础。
（三）注意事项
1.玻璃容器的清洁：玻璃表面污染会干扰胶体金颗粒的生成，用前经过强酸洗，后硅化。
2.试剂、水质和环境：氯金酸极易吸潮，对金属有腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平
称盘。其1%水溶液在4℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，中的尘粒要尽量减少，否则
实验的结果将缺乏重复性。
二、免疫金
（一）原理：蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。
（二）技术要点
1.胶体金溶液的pH：原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏碱。
2.蛋白质最适标记量
（三）注意事项
多种蛋白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的高分子稳定剂，PEG和BSA是最常用的稳定剂。稳
定剂有两大作用：
①为保护胶体金的稳定性，使之便于长期保存；
②为防止或减少免疫金复合物的非特异性吸附反应。
第三节膜载体免疫测定的种类与原理
Chapter12SolidPhaseMembrane
Immunoassay
Section1
Overview
Solid-phasemembraneimmunoassaysusemicroporousmembranesasthesolidphase.Thecharacteristicsofthesolid-phase
membraneareitsporosity,highnon-covalentbondadsorptionofantibodiesor,andeasyrinsing.Thesolid-phasemembrane,
likefilterpaper,canbepassedthroughbyliquidandflowout,andtheliquidcanalsomoveforwardonthemembranethroughcapillary
action.Marker
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