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芽孢杆菌脂肪酶毕赤酵母表达系统酶学特性研究
目录
芽孢杆菌脂肪酶毕赤酵母表达系统酶学特性研究（1）．．．．．．．．．．．．3
内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1芽孢杆菌脂肪酶的研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.2毕赤酵母表达系统的选择理由．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.3研究目的及内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
芽孢杆菌脂肪酶的分子特性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
2.1芽孢杆菌脂肪酶的蛋白结构分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
2.2芽孢杆菌脂肪酶的酶活性测定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
2.3其他酶学性能的研究，包括稳定性与底物特异性等．．．．．．．．．．15
脂肪酶的毕赤酵母表达验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
3.1酵母表达质粒构建及其鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
3.2靶向基因的克隆与表达构造定向优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
3.3毕赤酵母表达系统中的重组脂肪酶的分离与纯化．．．．．．．．．．．．24
重组脂肪酶的活性与稳定性测试．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
4.1活体细胞培养及重组脂肪酶活性的中量检测试验．．．．．．．．．．．．26
4.2重组脂肪酶的理化性质与稳定性测试．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
4.3重组脂肪酶催化活性的功能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
脂肪酶生物应用与未来展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
5.1毕赤酵母融合表达系统作为研究脂肪酶应用的基础．．．．．．．．．．33
5.2重组芽孢杆菌脂肪酶的工业应用可能性分析．．．．．．．．．．．．．．．．35
5.3脂肪酶技术的发展与企业技术团队建设的策略．．．．．．．．．．．．．．38
结论与建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
6.1研究结果的总结概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
6.2针对下一步工作的建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
芽孢杆菌脂肪酶毕赤酵母表达系统酶学特性研究（2）．．．．．．．．．．．45
内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
1.1芽孢杆菌脂肪酶的研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
1.2毕赤酵母表达系统简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
1.3文章目的与结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
芽孢杆菌脂肪酶的化学与生物特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
2.1芽孢杆菌脂肪酶的分子结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53
2.2芽孢杆菌脂肪酶的催化特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55
毕赤酵母表达系统的基础知识．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62
3.1毕赤酵母的特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63
3.2表达系统的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66
3.3质粒的构建与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．67
芽孢杆菌脂肪酶在毕赤酵母中的表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69
4.1质粒的感受态制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72
4.2质粒转染．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73
4.3表达产物的鉴定与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76
芽孢杆菌脂肪酶的酶学特性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．77
5.1表达产物的酶活性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
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