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2025年临床基因扩增试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）

1.关于聚合酶链式反应（PCR）的基本步骤，正确的顺序是：

A.退火→变性→延伸

B.变性→延伸→退火

C.变性→退火→延伸

D.延伸→变性→退火

2.设计PCR引物时，以下哪项不符合原则？

A.引物长度18-25bp

B.引物GC含量40%-60%

C.3’端避免连续3个G/C

D.引物间互补序列超过5bp

3.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用是：

A.特异性结合双链DNA

B.标记探针5’端荧光基团

C.淬灭荧光信号

D.识别靶序列单链区域

4.临床基因扩增实验室设置内标的主要目的是：

A.监测扩增效率

B.排除假阳性

C.校准仪器误差

D.验证试剂有效性

5.实时荧光定量PCR中，“平台期”出现的主要原因是：

A.引物耗尽

B.模板浓度过高

C.Mg2?浓度不足

D.热启动酶未激活

6.以下哪种污染是临床基因扩增实验室最常见的交叉污染来源？

A.样本间核酸污染

B.环境中气溶胶污染

C.试剂本身携带的污染

D.仪器内部残留污染

7.采用绝对定量法检测HBVDNA时，标准品的制备要求不包括：

A.与靶序列同源性≥95%

B.浓度需经国际标准品溯源

C.需包含内源性参照基因

D.稳定性需经长期验证

8.逆转录PCR（RT-PCR）中，若选择Oligo(dT)引物进行逆转录，最适用于：

A.环状RNA

B.总mRNA

C.长链非编码RNA

D.病毒单链RNA

9.熔解曲线分析中，出现双峰的可能原因是：

A.引物二聚体形成

B.模板浓度过低

C.退火温度过高

D.Taq酶活性异常

10.临床基因扩增实验室分区中，“扩增产物分析区”与“试剂准备区”之间的压差应满足：

A.正压≥5Pa

B.负压≥5Pa

C.正压≥10Pa

D.负压≥10Pa

11.检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）时，选择ORF1ab和N基因双靶标设计的主要目的是：

A.提高检测灵敏度

B.降低引物二聚体风险

C.避免病毒变异导致的漏检

D.缩短扩增时间

12.以下哪种情况会导致荧光定量PCR结果Ct值偏大？

A.模板中存在PCR抑制物

B.引物浓度过高

C.退火温度过低

D.扩增循环数增加

13.实验室使用全自动核酸提取仪时，若同一批次样本中阴性对照出现阳性结果，首先应排查：

A.提取仪加样针污染

B.试剂配置错误

C.样本采集不规范

D.扩增仪温度偏差

14.人乳头瘤病毒（HPV）分型检测中，采用多重PCR技术的关键是：

A.优化引物浓度比例

B.增加扩增循环数

C.提高变性温度

D.使用热启动酶

15.结核分枝杆菌（MTB）核酸检测中，若样本为痰液，预处理时需加入NaOH的主要作用是：

A.灭活病毒

B.消化黏液成分

C.裂解结核杆菌细胞壁

D.中和酸性环境

16.以下关于基因扩增实验室质量控制的描述，错误的是：

A.每批次检测需包含阴性质控、阳性质控

B.阳性质控浓度应接近检测下限

C.室内质控数据需保存至少2年

D.仪器校准应使用计量认证的标准物质

17.数字PCR（dPCR）与实时荧光定量PCR的主要区别是：

A.无需标准曲线

B.依赖Ct值计算

C.可检测低丰度突变

D.对抑制物更敏感

18.检测血浆游离DNA（cfDNA）时，若样本溶血，可能导致：

A.cfDNA浓度假性升高

B.扩增效率提高

C.熔解曲线峰型变窄

D.内标Ct值偏小

19.基因扩增实验室操作中，以下哪项符合生物安全要求？

A.在扩增产物分析区进行样本处理

B.戴手套接触公共物品后无需更换

C.使用后枪头直接丢弃于普通垃圾桶

D.实验结束后用10%次氯酸钠擦拭台面

20.多重荧光PCR中，选择不同荧光通道的原则是：

A.荧光基团发射光谱无重叠

B.荧光强度一致

C.淬灭基团类型相同

D.探针长度一致

21.以下哪种物质可有效去除实验室环境中的DNA污染？

A.75%乙醇

B.紫外线（254nm）照射

C.去离子水

D.生理盐水

22.检测BRCA