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2025版动物新型冠状病毒感染诊断技术

1范围

本文件规定了动物新型冠状病毒感染的临床诊断、样品采集、处理和保存、荧光RT-PCR和病毒分离鉴定等方法的技术要求。

本文件适用于动物新型冠状病毒感染的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CPE:细胞病变(CytopathicEffect)

Ct值:循环阈值(CycleThreshold)

DMEM:培养基(Dulbecco’SModifiedEagleMedium)

EDTA:乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraaceticAcid)

FBS:胎牛血清(FetalBovineSerum)

N:核衣壳蛋白(NucleocapsidProtein)

ORF1ab:开放阅读框1ab(OpenReadingFrame1ab)

PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferSolution)

RNA:核糖核酸(RibonucleicAcid)

RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction)

SARS-CoV-2:新型冠状病毒(SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2)

Vero:非洲绿猴肾细胞(AfricanGreenMonkeyKidney)

VeroE6:非洲绿猴肾细胞E6(AfricanGreenMonkeyKidneyE6)

5生物安全要求

进行动物新型冠状病毒感染的检测和诊断时,样品采集与处理、核酸提取和病毒分离鉴定等,按照

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GB19489的规定执行。

6临床诊断

6.1流行病学

6.1.1传染源:主要为SARS-CoV-2感染的患者和动物,及受污染的物品和环境。

6.1.2传播途径:主要经呼吸道飞沫和密切接触传播,在相对封闭环境中可经气溶胶传播。

6.1.3易感动物:主要为貂等鼬科动物;猫、狮子、虎和豹等猫科动物;大猩猩等非人类灵长类动物;鼠等啮齿类动物;白尾鹿和犬等其他动物。老龄动物较易感。

6.2临床症状

6.2.1呼吸道症状:咳嗽、喷嚏、流涕、呼吸窘迫。

6.2.2消化道症状:呕吐、腹泻。

6.2.3全身症状:发烧、食欲不振、嗜睡。

6.3病理变化

6.3.1影像学检查:可见肺叶有毛玻璃混浊和/或斑片状病变。

6.3.2眼观病变:可见鼻和气管黏膜上皮局部充血、水肿以及分泌物等。

6.3.3组织病理学检查:肺泡腔内充满粉红色渗出液、淋巴细胞和脱落的上皮细胞;肺泡间隔增宽,有大量渗出液;部分感染动物小肠上皮细胞变性、坏死。

6.4临床判定

符合6.1,且出现6.2或6.3中的一条或多条情况时,可初步判定为临床疑似感染。确诊应采集样品进行实验室诊断。

7样品采集、处理和保存

7.1仪器设备

7.1.1台式高速冷冻离心机。

7.1.2组织匀浆器或研磨器。

7.1.3高压灭菌器。

7.1.4漩涡振荡器。

7.1.5生物安全柜:Ⅱ级或Ⅱ级以上。

7.1.6微量可调移液器(100μL和1000μL)。

7.2试剂材料

7.2.1除另有规定外,所用试剂均为分析纯,所用水为GB/T6682规定的二级水。

7.2.20.01mol/LPBS(pH7.2),配制方法按照附录A中A.1。

7.2.3样品稀释液,配制方法按照A.2。

7.2.4采样管:2mL,无菌无核酸酶