基因工程的基本操作程序1优品文档.pptVIP

基因工程的基本操作程序;基因工程的基本操作程序;为什么要有“目的基因的获取”这一步？;真核细胞的基因结构;目的基因主要是______________________，也可以是一些具有调控作用的因子;1）从基因文库中获取目的基因;将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。;2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类;3、基因文库的构建;基因组DNA文库;真核生物转录过程;文库类型;村长,为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物中提取不行吗？？？

;1、概念：PCR全称为_______________，是一项

在生物____复制___________的核酸合成技术

通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因

因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。;四种脱氧核苷酸(dNTP);PCR扩增仪;如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。

①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取

在热作用下，断裂，形成_______

部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，

（4）为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等；

如：cDNA文库

终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。

有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。

a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板

B．有利于对目的基因是否导入进行检测

如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；

基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类;PCR仪;一次性

吸液枪头;利用PCR技术扩增目的基因;;通过DNA合成仪用化学方法人工合成;为什么要有“表达载体的构建”这一步？;;基因表达载体的组成：;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。;;方法;农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸???植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上;基因枪法;花粉管通道法;显微注射法;2.微生物作受体细胞原因：;不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;;;如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。;;基因工程的基本操作程序;思考：1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？;③从受体细胞中提取④利用PCR技术

①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取

（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成

引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补

如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。

2）利用PCR技术扩增目的基因

C．质粒都可作为运载体

如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。

基因DNA的核苷酸序列

一小段单链DNA或RNA，一般20～30个碱基，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。

四种脱氧核苷酸(dNTP)

利用PCR技术扩增目的基因

繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少

但是，有时我们完全不知道目的基因序列，或者想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道几种生物之间有哪些基因不同，或者想知道一种生物在不同的发育阶段都表达哪些基因，或者想得到一种生物的全部基因序列，往往就需要构建基因文库。

未知目的基因的核苷酸序列

基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类

——感受态细胞吸收DNA分子;2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做?;3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？;（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。

（2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。

（3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。

（4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。;1.下表关于基因