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免疫学实验技术规程

一、概述

免疫学实验技术是现代生物学和医学研究的重要手段，广泛应用于疾病诊断、药物研发、生物制品质量控制等领域。本规程旨在规范免疫学实验操作流程，确保实验结果的准确性和可重复性。主要内容包括实验准备、样本处理、试剂配制、实验操作、结果分析与记录等环节。

二、实验准备

（一）实验室环境

1.实验室应保持清洁、干燥，温度控制在20-25℃之间，湿度维持在40%-60%。

2.空气净化系统应定期维护，确保无尘环境。

3.实验台面应使用防腐蚀、易清洁的材料。

（二）仪器设备

1.移液器：精度为±0.5μL，校准周期不超过6个月。

2.酶标仪：检测范围0-4OD，校准周期不超过3个月。

3.水浴锅：温度控制精度±0.5℃，定期校准。

4.超低温冰箱：温度稳定在-80℃，定期检测温度分布。

（三）试剂与耗材

1.试剂：优先选用分析纯或更高纯度的化学试剂。

2.耗材：一次性无菌吸头、离心管、培养皿等，使用前需灭菌处理。

3.保存：试剂应按说明书要求储存，避免光照和高温。

三、样本处理

（一）血清样本

1.离心：样本采集后立即4℃离心3000r/min，10分钟。

2.分离：取上清液，避光保存于-20℃或-80℃。

3.处理：使用前37℃水浴融化，混匀后检测无溶血。

（二）组织样本

1.固定：新鲜组织立即浸泡于4%多聚甲醛溶液中，24小时固定。

2.石蜡包埋：脱水、浸蜡、包埋，切片厚度5-7μm。

3.脱蜡：切片置于二甲苯中脱蜡，梯度乙醇水化。

（三）细胞样本

1.收集：培养细胞用PBS缓冲液洗涤2次，收集悬浮细胞。

2.离心：1000r/min离心5分钟，去除培养基。

3.洗涤：重悬细胞于PBS，重复洗涤2次。

四、实验操作

（一）酶联免疫吸附实验（ELISA）

1.固定：包被抗体37℃孵育2小时，4℃过夜。

2.封闭：TBST洗涤3次，加入封闭液37℃孵育1小时。

3.结合：洗涤后加入样本或标准品，37℃孵育1小时。

4.显色：洗涤后加入TMB底物，避光反应30分钟。

5.终止：加入终止液，酶标仪检测OD值（450nm）。

（二）流式细胞术（FCM）

1.标记：细胞重悬于PBS，加入荧光抗体4℃孵育30分钟。

2.洗涤：PBS洗涤2次，去除未结合抗体。

3.上机：细胞悬液加入流式细胞仪，设置检测参数。

4.分析：收集数据后用FlowJo软件进行统计分析。

（三）WesternBlot

1.电泳：SDS分离蛋白，转移至PVDF膜。

2.封闭：TBST洗涤后，加入5%脱脂奶粉封闭1小时。

3.一抗：洗涤后加入稀释抗体，4℃孵育过夜。

4.二抗：TBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，37℃孵育1小时。

5.显影：ECL发光液孵育，化学发光成像系统采集图像。

五、结果分析与记录

（一）数据采集

1.ELISA：记录各孔OD值，绘制标准曲线。

2.FCM：记录细胞凋亡率、颗粒度等参数。

3.WesternBlot：分析条带灰度值，计算相对表达量。

（二）质量控制

1.重复实验：每个样本设置平行重复，确保结果一致性。

2.阴阳性对照：每批实验加入标准对照，验证实验有效性。

3.数据校准：使用校准品校正仪器，减少系统误差。

（三）记录规范

1.实验日志：记录日期、试剂批号、操作人员等信息。

2.数据保存：原始数据保存于电子文档，备份至云端。

3.结果报告：撰写实验报告，包含方法学评价和结论。

六、安全注意事项

（一）个人防护

1.手套：操作生物样本时佩戴无菌手套。

2.防护眼镜：避免化学试剂溅入眼睛。

3.口罩：必要时佩戴医用口罩。

（二）废弃物处理

1.化学废弃物：按实验室规定分类收集。

2.生物样本：高压灭菌后统一处理。

3.耗材：一次性用品直接丢弃。

（三）应急措施

1.溅洒：立即用大量水冲洗，必要时就医。

2.火灾：熟悉灭火器位置，保持消防通道畅通。

3.设备故障：及时报告维修，避免操作风险。

一、概述

免疫学实验技术是现代生物学和医学研究的重要手段，广泛应用于疾病诊断、药物研发、生物制品质量控制等领域。本规程旨在规范免疫学实验操作流程，确保实验结果的准确性和可重复性。主要内容包括实验准备、样本处理、试剂配制、实验操作、结果分析与记录等环节。

二、实验准备

（一）实验室环境

1.实验室应保持清洁、干燥，温度控制在20-25℃之间，湿度维持在40%-60%。

2.空气净化系统应定期维护，确保无尘环境。

3.实验台面应使用防腐蚀、易清洁的材料。

4.紫外线灯应定期消毒，每日操作前后进行空气和台面照射（30分钟）。

5.废弃物分类存放：生物废弃物需高压灭菌后处理，化学废弃物按危险品规定分类收集。

（二）仪器设