检验科生化项目SOP.docVIP

武汉市蔡甸区人民医院检验科

生化作业指导书

文件编号

LAB-WHCDQRMYY-SOP.SH-05-001

页号

第1页共5页

版本/修改次数

第3版第0次修改

丙氨酸氨基转移酶测定

审核人

王楚明

批准人

肖昌国

发布日期

2012年5月12日

丙氨酸氨基转移酶(ALT)-酶法

1.临床意义

丙氨酸氨基转移酶(ALT)是肝细胞损伤的灵敏指标，各种肝炎急性期、许多药物引起的肝病和肝细胞坏死均可见显著增高。肝脏疾病及其它疾病引起的肝脏损伤均可引起ALT不同程度的增高。

2.实验原理

L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸

丙酮酸+NADH+H+LDHL-乳酸+NAD++H2O

在340nm连续监测吸光度下降速率，其下降速率与样品中ALT的活力成正比。

2.1反应类型：速率法

2.2延迟时间：1分钟

2.3测定波长：340nm

2.4样本/试剂体积：S：R1：R2=1：20：5

2.5孵育温度：37℃

2.6校准类型：线性

2.7结果计算：

2.7.1C样本=（ΔA样本/ΔA标准）×C标准

2.7.2使用理论K值（ε=6.22）

注：TV：总反应体积ε：摩尔消光系数SV：样本体积L：光径（cm）

双试剂反应：样本浓度=?A/min?4180

单试剂反应：样本浓度=?A/min?3376

3.样本准备

血清，ALT活性2-8?C保存可稳定7天。

武汉市蔡甸区人民医院检验科

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LAB-WHCDQRMYY-SOP.SH-05-001

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版本/修改次数

第3版第0次修改

丙氨酸氨基转移酶测定

审核人

王楚明

批准人

肖昌国

发布日期

2012年5月12日

4.试剂

4.1包装规格：

货号

规格

GB000G

R1:4×100mlR2:2×50ml

GS001G

R1:6×60mlR2:2×45ml

GH001G

R1:2×50mlR2:1×25ml

GT001G

R1:5×48mlR2:2×30ml

4.2试剂成份

试剂成份

浓度

试剂R1:

Tris缓冲液(PH=7.50)

100mmol/l

L-丙氨酸

500mmol/l

LDH

≥1200U/l

试剂R2:

NADH

α-酮戊二酸

0.18mmol/l

15mmol/l

4.3试剂准备

4.3.1双试剂反应：液体试剂开瓶即用。

4.3.2单试剂反应：R1∶R2=4∶1混匀备用。

4.4试剂储藏和稳定期

4.4.12-8℃避光保存，稳定至效期。

4.4.2已经开启的试剂注意避免污染。

4.4.3单试剂工作液2-8℃避光保存，稳定4周；室温稳定5天。

4.4.4试剂工作液的初始吸光度1.0000时不得使用。

武汉市蔡甸区人民医院检验科

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LAB-WHCDQRMYY-SOP.SH-05-001

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版本/修改次数

第3版第0次修改

丙氨酸氨基转移酶测定

审核人

王楚明

批准人

肖昌国

发布日期

2012年5月12日

5.校准

5.1推荐使用朗道多项校准品

CAL235020×5ml

CAL235120×5ml

5.2校准准备

按使用要求小心开启校准品瓶盖，避免冻干粉末撒落。每瓶冻干校准品准确加入5毫升蒸馏水复溶。小心盖紧瓶盖，静置30分钟，使其充分溶解后混匀备用。

注意：严禁强烈振荡。

5.3校准品复溶后稳定性：

25℃避光保存稳定8小时，

2-8℃避光保存稳定1周，

-20℃避光保存稳定1个月。

5.4参数设置

按校准品使用说明书，参照对应方法学选用校准值。

6.质控

6.1 准确性：Randox质控血清 HN1530（正常值）HE1532（病理值）

精确度：Randox质控血清，CV10%

6.2质控准备：

按使用要求小心开启瓶盖，避免冻干粉末撒落。每瓶冻干血清加入5毫升蒸馏水

复溶。小心盖紧瓶盖，静置30分钟，使其充分溶解后混匀备用。

注意：严禁强烈振荡。

6.3质控品复溶后稳定性：

同校准品。

6.4参数设置

按质控品使用说明书，参照对应方法学设置靶值和偏差值。

6.5