Xist Tale r - dTFs介导小鼠iPS细胞系构建及多能性解析.docxVIP

XistTaler-dTFs介导小鼠iPS细胞系构建及多能性解析

一、引言

1.1研究背景与意义

诱导性多能干细胞（inducedPluripotentStemCells，iPS细胞）技术自2006年被日本科学家山中伸弥首次报道以来，在生命科学领域引发了一场革命。iPS细胞是通过基因转染技术将某些转录因子导入动物或人的体细胞，使体细胞直接重构成为胚胎干细胞（embryonicstemcell,ESC）细胞样的多潜能细胞。其具有自我更新能力和分化潜能，功能与胚胎干细胞类似，却避免了胚胎研究面临的伦理学问题，理论上可从任何组织的成体细胞制造出具有干细胞功能的细胞，为再生医学、疾病研究和药物开发等领域带来了新的曙光。在再生医学领域，iPS细胞有望成为细胞治疗和组织器官再生的重要细胞来源。例如，对于患有糖尿病的患者，可将其自身细胞诱导为iPS细胞，再分化为胰岛β细胞进行移植，从而实现疾病的治疗。在疾病研究方面，利用患者特异性的iPS细胞分化成相关的病变细胞，能够构建疾病模型，深入研究疾病的发病机制，为开发新的治疗方法提供有力支持。

X染色体失活（Xchromosomeinactivation，XCI）是哺乳动物早期胚胎发育以及体外建立的细胞分化及重编程过程中的重要现象，其关键调控因子长非编码RNA（longnon-codingRNA，LncRNA）基因Xist起着核心作用。Xist通过顺式缠绕目的失活的X染色体，介导多种RNA/蛋白复合物的募集，最终启动XCI的发生。在体细胞重编程中，Xist的作用备受关注。基于类转录激活效应物设计的体外转录因子（Transcriptional-activator-likeeffectorsbaseddesignerTranscriptionFactors，Tale-dTFs）为研究Xist在体细胞重编程中的作用提供了新的工具。此前研究发现，Xist抑制因子R4和R6均对小鼠诱导性多能干细胞系的形成具有促进作用，其中R6的促进作用更为明显。然而，由XistR-dTFs诱导的小鼠iPSC的嵌合体形成能力尚未见报道，这也凸显了进一步研究的必要性。

本研究聚焦于利用XistTaler-dTFs来源建立小鼠iPS细胞系并进行多能性鉴定，具有重要的理论和实际意义。从理论层面来看，深入探究XistTaler-dTFs在小鼠iPS细胞系建立过程中的作用机制，有助于我们更全面地理解体细胞重编程的分子调控网络，填补该领域在Xist相关调控机制研究上的部分空白，丰富和完善干细胞重编程理论。在实际应用方面，成功建立小鼠iPS细胞系并确保其多能性，将为再生医学提供更优质、安全的细胞来源。通过对小鼠iPS细胞系的研究，有望为人类疾病的细胞治疗提供更可靠的实验依据和技术支持，推动再生医学从基础研究向临床应用的转化进程。同时，也为开发针对特定疾病的治疗方法提供了新的途径和策略，为解决人类健康问题带来新的希望。此外，该研究成果还可能为药物研发提供更有效的细胞模型，加速新药的研发进程，提高药物研发的成功率和安全性。

1.2国内外研究现状

在国际上，iPS细胞技术的研究一直处于生命科学领域的前沿。自山中伸弥发现iPS细胞以来，各国科学家纷纷投入到这一领域的研究中。美国、日本等国家在iPS细胞的基础研究和应用探索方面取得了众多显著成果。在利用转录因子诱导iPS细胞的研究中，不断有新的转录因子组合被尝试和发现，以提高诱导效率和细胞质量。例如，一些研究尝试在传统的Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4（简称SKOM）四种转录因子基础上，添加其他辅助因子，如Lin28、Nanog等，以优化诱导条件。在Xist与体细胞重编程关系的研究上，国外团队利用Tale-dTFs技术对Xist在重编程过程中的功能进行了深入剖析。研究发现，Xist的表达变化会影响重编程过程中染色质的结构和基因表达模式，进而影响iPS细胞的诱导效率和多能性维持。然而，对于XistTaler-dTFs来源的小鼠iPS细胞系的嵌合体形成能力及相关机制研究仍较为匮乏。

在国内，iPS细胞技术的研究也发展迅速，众多科研团队在该领域取得了一系列重要进展。在建立高效的iPS细胞诱导体系方面，国内学者通过改进转染技术、优化培养条件等方法，提高了iPS细胞的诱导效率和稳定性。在iPS细胞的应用研究上，积极探索其在疾病治疗、药物筛选等方面的潜力。例如，利用患者特异性iPS细胞构建疾病模型，研究遗传性疾病的发病机制，并尝试开发相应的治疗策略。在Xist