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氨基苯并咪唑配基修饰的疏水性电荷诱导层析介质：制备、性能与蛋白吸附机制

一、引言

1.1研究背景与意义

在生物分离领域，高效、精准的分离技术对于获取高纯度生物制品至关重要。疏水性电荷诱导层析（HydrophobicChargeInductionChromatography，HCIC）技术作为一种新型的混合模式层析方法，近年来受到了广泛关注。它巧妙地结合了疏水作用和静电相互作用，在蛋白质、抗体等生物大分子的分离纯化中展现出独特优势，为生物制品的制备提供了更有效的手段。

随着生物技术的飞速发展，对生物大分子的分离纯化提出了更高的要求。传统的层析技术，如离子交换层析、凝胶过滤层析等，虽在一定程度上能够实现生物分子的分离，但在面对复杂的生物样品时，往往存在选择性不足、分离效率低等问题。HCIC技术的出现，有效弥补了这些传统技术的缺陷，其在温和的条件下即可实现目标生物分子的高效分离，不仅提高了分离效率，还能更好地保持生物分子的活性和功能。

在众多HCIC功能配基中，氨基苯并咪唑配基因其独特的结构和性质，展现出良好的应用潜力。它能够与蛋白质分子形成特异性的相互作用，从而实现对目标蛋白质的高效捕获和分离。然而，目前对于含氨基苯并咪唑配基层析介质的研究仍存在一些不足，如配基与基质的偶联方式、层析介质的稳定性和选择性等方面，仍有待进一步优化和改进。

本研究旨在深入探究基于氨基苯并咪唑配基的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，通过优化制备工艺，提高层析介质的性能，并系统研究其对蛋白质的吸附行为和分离效果。这不仅有助于丰富和完善HCIC技术的理论体系，还将为生物大分子的分离纯化提供新的技术支持和实践经验，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2疏水性电荷诱导层析（HCIC）概述

疏水性电荷诱导层析（HCIC）是一种结合了疏水作用和静电相互作用的混合模式层析技术。其基本原理基于配基在不同pH条件下的电荷状态变化以及与蛋白质分子之间的相互作用。在中性pH条件下，HCIC配基中的疏水基团与蛋白质分子表面的疏水区域通过疏水相互作用结合，而此时配基不带电荷或仅带有少量电荷，静电相互作用较弱。当溶液pH发生变化时，配基中的某些基团会发生质子化或去质子化，从而使配基带上电荷，与带相同电荷的蛋白质分子之间产生静电排斥作用，促使蛋白质从配基上解离下来，实现洗脱分离。

HCIC的发展历程可以追溯到20世纪90年代，由Burton和Harding首次提出。此后，随着对其原理和应用的深入研究，HCIC技术逐渐得到完善和发展。早期的研究主要集中在配基的设计和筛选上，通过合成不同结构的配基，探索其与蛋白质分子的相互作用机制，以提高层析介质的选择性和吸附性能。近年来，随着材料科学和生物技术的不断进步，HCIC技术在层析基质的选择、配基与基质的偶联方式以及层析过程的优化等方面取得了显著进展，使其在生物分离领域的应用更加广泛和深入。

与传统的层析技术相比，HCIC具有诸多优势。首先，HCIC在低盐和高盐条件下均能实现蛋白质的有效结合，拓宽了其应用范围，使其能够适应不同组成的生物样品。其次，HCIC的洗脱条件相对温和，通常只需调节溶液的pH值即可实现蛋白质的洗脱，避免了使用高浓度盐溶液或有机溶剂对蛋白质活性的影响，有利于保持蛋白质的生物活性和功能。此外，HCIC的选择性较好，能够通过合理设计配基结构，实现对特定蛋白质的特异性分离，提高分离效率和纯度。

HCIC技术在生物分离领域具有广泛的应用。在蛋白质纯化方面，它可用于从复杂的生物样品中分离和纯化各种蛋白质，如酶、抗体、细胞因子等。在抗体分离中，HCIC能够高效地从细胞培养液、血清等样品中捕获抗体，且对抗体的活性和纯度影响较小，为抗体药物的研发和生产提供了重要的技术支持。HCIC还在生物制药、食品工业、环境监测等领域有着潜在的应用，如用于生物药物的质量控制、食品中蛋白质的检测和分析以及环境中污染物的监测等。

1.3氨基苯并咪唑配基在HCIC中的研究现状

氨基苯并咪唑配基作为一种具有独特结构和性质的功能配基，在疏水性电荷诱导层析（HCIC）中受到了广泛的研究关注。其分子结构中含有苯并咪唑环和氨基，这种结构赋予了配基良好的疏水性能和潜在的电荷调节能力，使其能够与蛋白质分子通过疏水作用和静电相互作用发生特异性结合。

在已有的研究中，以氨基苯并咪唑为配基的HCIC介质展现出了一些优异的性能。中国发明专利CN104096544A报道了一种用于抗体分离的HCIC介质，该介质以氨基苯并咪唑为功能配基，具有较高的抗体结合能力和非盐依赖吸附性能。在中性pH条件下，氨基苯并咪唑配基的疏水部分能够与抗体分子表面的疏水区域紧密结合，实现对抗体的有效捕获；当调节