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黑果枸杞超微粉工艺优化及花色苷对HepG2细胞脂质积累的调控机制研究

一、引言

1.1研究背景

黑果枸杞（LyciumruthenicumMurr.）作为茄科枸杞属多年生灌木，主要分布于中国西北部盐化沙漠地区，集中在青海、新疆等地，是一种极具价值的药食两用植物。在藏药中，黑果枸杞被称为“旁玛”，其味甘、性平、清心热，在《晶珠本草》中被列为传统珍贵中药。它不仅可直接食用或用于饮品制作，还在治疗心脏病、高血压、月经不调、更年期紊乱、癣疖、尿道结石、牙龈出血等方面具有药用价值。现代药理学研究表明，黑果枸杞具有抗氧化、抗动脉粥样硬化、增强免疫力、降血脂、抗衰老等作用，这主要归功于其富含的花色苷、多糖等生物活性成分。

超微粉工艺是近年来新兴的食品加工技术，该技术通过机械或流体动力，将物料颗粒粉碎至粒径几微米到几十微米之间。当物料被超微粉碎后，会产生诸多特性，如具有较大的表面积和孔隙率，质量均匀，溶解性、吸附性、流动性良好，化学反应速度加快，溶解度增大，烧结温度降低且烧结体强度提高，填充补强性能优越，同时还具备独特的光、电、磁性能等。从微观角度来看，超微粉碎过程使机械能转化为多余的自由能和弹性应力，引发弹性应力迟豫，造成分子间的晶格畸变、晶格缺陷、无定形化、表面自由能增大以及自由基生成等机械力化学效应。在中药和食品领域，超微粉工艺能够显著提高有效成分的溶出率，优化理化性质，促进成分浸提，提高药效或营养价值，便于后期加工与制剂制备。将超微粉工艺应用于黑果枸杞加工，有望提升其生物活性成分的释放和利用效率，进一步挖掘其潜在价值。

肝脏是人体脂类代谢的核心器官，正常情况下肝脏内总脂肪含量占肝脏重量的4％-5％。然而，当肝脏内脂肪的分解与合成代谢失衡或运出受阻时，脂肪（主要是甘油三酯和脂肪酸）就会在肝细胞内过量积聚，引发肝脏脂肪积聚问题。肝脏脂肪积聚不仅会对肝脏自身造成损害，如引发脂肪肝，在“二次打击学说”下，易进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌；还会对肝外器官产生不良影响，如诱导胰岛素抵抗，引发脂毒性；更会对全身代谢产生负面影响，促进2型糖尿病和动脉粥样硬化的发生，导致代谢综合征相关的肿瘤和心脑血管事件高发。目前，治疗肝脏脂肪积聚的方法主要针对原发病因，包括运动、饮食疗法以及药物治疗，但药物治疗大多存在副作用。因此，寻找安全有效的天然化学物质来减少肝脏脂肪积聚具有重要意义。黑果枸杞中的花色苷作为一种天然的水溶性类黄酮化合物，具有抗氧化、抗炎、保护心血管等多种生理功能，研究其对HepG2细胞脂质积累的影响，对于探索预防和治疗肝脏脂肪积聚相关疾病的新途径具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

在黑果枸杞超微粉工艺方面，已有研究关注到超微粉碎对黑果枸杞粉体特性和活性成分溶出的影响。有学者利用流化床气流粉碎机对黑果枸杞进行超微粉碎，通过单因素试验和正交试验优化，确定了最佳粉碎工艺参数，发现在此条件下获得的黑果枸杞超微粉平均粒度小于20μm，且多糖、花色苷溶出含量以及抗氧化能力明显高于普通粗粉。也有研究开发了低温超微粉碎枸杞全粉工艺，并研制了相应设备，采用真空低温烘干、真空送料、低温超微粉碎工艺，具有一定创新性。但目前对于不同超微粉碎设备和工艺参数对黑果枸杞超微粉品质的综合影响研究还不够全面，缺乏系统性的对比和优化。

关于花色苷的提取，传统溶剂提取法由于效能较低已很少单独使用，新兴方法如超声法、微波法、高压脉冲电场法、负压空化法、低共熔溶剂法、酶解法、超临界CO2法等逐渐受到关注。这些新兴方法常以花色苷提取量为响应值，利用响应面法进行工艺优化。在纯化方面，大孔树脂法较为常用，色谱法通常用于制备纯度在90%以上的花色苷。然而，针对黑果枸杞花色苷的高效提取和纯化工艺，仍需进一步探索和完善，以提高花色苷的纯度和得率。

在花色苷对细胞脂质积累影响的研究中，已有研究表明花色苷具有抗肥胖作用，作用于鼠源3T3-L1前脂肪细胞，可减少细胞数量，抑制其分化为成熟脂肪细胞；蓝莓花色苷提取物干预人脂肪干细胞（hADSCs），能降低其增殖，抑制细胞分化，减少脂质堆积；桑葚花色苷可降低油酸诱导的HepG2细胞脂质沉积，在制备预防和治疗非酒精性脂肪肝保健食品和药物中具有潜在应用。但对于黑果枸杞花色苷改善HepG2细胞脂质积累的具体作用机制，如对相关信号通路和关键蛋白表达的影响，目前还缺乏深入研究。

1.3研究目的与意义

本研究旨在优化黑果枸杞超微粉工艺，提高其活性成分的溶出和利用效率，并深入探究黑果枸杞花色苷改善HepG2细胞脂质积累的作用机制，为黑果枸杞的深度开发利用提供理论依据和技术支持。

黑果枸杞作为一种具有丰富生物活性成分的药食两用植物，目前其开发利用程度相对较低。通过优化超微粉工艺，能够提