DB23T 3755-2024 植物寄生线虫趋化行为测定技术规程.docxVIP

ICS65.020.20CCSB16

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T3755—2024

植物寄生线虫趋化行为测定技术规程

2024-08-30发布2024-09-29实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T3755—2024

前言

本文件依据GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省农业农村厅提出。

本文件起草单位：中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心、黑龙江省农业科学院大庆分院，铁力市农业综合服务中心。

本文件主要起草人：李春杰、王从丽、姜野、谢倚帆、周长军、韦柳利、王旋、徐彬钰、黄铭慧、吴黎黎。

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植物寄生线虫趋化行为测定技术规程

1范围

本文件规定了植物寄生线虫趋化行为测定技术中的原理、仪器设备、器具和试剂、前期准备工作、植物寄生线虫对植物根的趋化行为测定和无害化处理。

本文件适用于植物寄生线虫中大豆孢囊线虫和蔬菜根结线虫趋化行为的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

SN/T2757植物线虫检测规范

DB23/T2476大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法

DB23/T3185设施番茄根结线虫病抗性鉴定技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

植物寄生线虫趋化行为

指植物寄生线虫受外界环境中信号刺激所产生的趋向性移动行为。

4原理

植物寄生线虫能够感应植物的根或根际微生物释放的化学信号而寻找寄主，利用模拟土壤三维环境的聚醚F127胶系统，通过观察植物寄生线虫对植物根趋向反应的特征，测定其趋化行为。

植物寄生线虫对植物根的反应特征主要表现为吸引、排斥和无趋化行为。

5仪器设备、器具和试剂

5.1仪器设备

体视显微镜（物镜1×、2×,目镜10×)、湿热灭菌器、冷藏冰箱、天平（感量0.01g）、磁力搅拌器和恒温培养箱等。

5.2器具

带盖无菌玻璃瓶（1000mL）、无菌搅拌子、无菌培养皿（直径60mm）、无菌注射器（10mL）和无菌刀片等。

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5.3试剂

聚醚F127胶粉可选用泊洛沙姆F127（CAS：9003-11-6）或同等性能的同类产品，无菌水符合GB/T6682中三级水。

6前期准备工作

6.1聚醚F127胶溶液的配制

配制方法如下：

a）将无菌水于4℃~10℃冷藏冰箱内预冷至少4h；

b）将200mL无菌水加入无菌玻璃瓶中，放入无菌搅拌子，称取聚醚F127胶粉115g加入该瓶中，再将200mL无菌水加入该瓶中聚醚F127胶粉上方；

c）盖上玻璃瓶盖后，置于磁力搅拌器上，于4℃~10℃下搅拌至透明液体，备用。在

4℃~10℃下保存，有效期3d。

6.2植物寄生线虫胶悬液的配制

配制方法如下：

a）线虫的培养及线虫的获得分别按照DB23/T3185和DB23/T2476执行；

b）将孵化3d以内的线虫沉淀，去除上清液，将线虫加入胶中，使每毫升聚醚F127胶溶液中含有300条～500条线虫；

c）在4℃~10℃条件下，用磁力搅拌器将线虫与聚醚F127胶溶液搅拌均匀，制成线虫胶悬液，现制现用。

6.3植物寄生线虫趋化反应器设置

设置方法如下：

a）将无菌培养皿置于冰上，用无菌注射器吸取线虫胶悬液10mL±0.5mL于培养皿内；

b）用无菌水将植物根表面清洗干净，用无菌刀片切下2cm～3cm的根尖，置于培养皿胶悬液中央，每皿放1个根尖，以不放根的为对照，至少重复6皿，在25℃~28℃培养。

7植物寄生线虫对植物根的趋化行为测定

通过植物寄生线虫的吸引率判断线虫的趋化反应，测定方法如下：

a）2h、6h、12h、24h和48h于体视显微镜下调查和拍照；

b）调查植物根尖部位0mm至5mm根表和对照组相应区域内植物寄生线虫总数；

c）计算线虫的吸引率，根表线虫吸引率大于对照的线虫表现为吸引，小于对照的线虫表现为排斥，与对照