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培养基配制与灭菌

一、培养基的配制方法

1．将配制好的母液按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。

2．将琼脂和糖加入热水中融化；

3．依次用专用的移液管按需要量吸取预先配制好的各种母液及生长调节剂等，混合在

一起，并加入到已融化的蔗糖与琼脂液中。

4．加入蒸馏水定容到所需要量，随即用0.1N～1.0N的氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）

将pH调至所需的数值（一般通过高压灭菌，pH值会向酸性一则偏移0.2～0.3），然后分装

到培养瓶中。（制备程序见图2-1）培养基的pH值因培养材料的来源而异，大多数植物都

要求在pH5.6～5.8的条件下进行组织培养。

二、培养基的灭菌

培养基一般采用湿热灭菌法，即把分注培养基后的培养器皿置入蒸汽灭菌锅中进行高温



高压灭菌。用1.1公斤/厘米2（15磅/英寸2)，121C的温度，灭菌15～20min，即可达

到灭菌的目的。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。进行高压蒸汽灭菌时，

要注意排出空气，一般是待水沸腾后蒸汽连续排出时，维持半分钟；或一开始就关闭排气阀，

待压力达到5磅时，然后排气。



灭菌后应尽快地转移培养瓶使其冷却。一般应将培养基储藏于30C以下的室内。

应当注意的是，某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，

不能和其它培养基一起高压消毒，而要进行过滤消毒。

液体培养基的配制方法，除不加琼脂外，其它与固体培养基相同。

三、注意事项与建议

1．了解MS培养基与1/2MS培养基和1/4MS培养基（改良型MS培养基）之间的区别：

大量元素、微量元素母液的吸取量不同。改良型的1/2MS和1/4MS培养基的吸取时是MS培

养基吸取量的1/2和1/4。

2．了解配方内植物生长调节剂母液的移取方法。

3．活性炭在水中易分层，应在培养基分装前后把分好的活性炭装入培养器皿中。

4．培养基pH值的调节应在锅内进行，调节时应细致：加入少量几滴0.1mol/LNaOH后

应充分搅拌使之均匀分布于培养基中，用精密pH试纸测试。

5．培养基的分装应“快、匀、净”：分装速度要“快”，避免分装过程中培养基的凝

固现象出现；培养基的分装要“匀”，一个培养容器中分装的培养基不能太多，也不能太少，

要适量；培养基分装过程不能出现手忙脚乱的情况，培养器皿的内外瓶壁、封口材料、工作

台上都不能粘上培养基要“干净”（易导致二次污染）

6．进一步熟练高压灭菌锅的使用原理、步骤与方法。

7．本次技能操作各小组可利用课余时间与项目任务挂钩，反复模拟、练习，制作出真

实的培养基。