微生物计数培养基适用性检查验证专项方案.docVIP

1.概述:培养基是微生物试验基础，直接影响微生物试验结果。适宜培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基确保。供试品微生物程度检验中所使用培养基应进行适用性检验。

2.验证目标：此次验证目标是确定需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数检验用胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基质量，和其制备程序、保留条件等是否满足微生物程度检验用要求。

3.验证依据：《中国药典》四部“非无菌产品微生物程度检验：微生物计数法”、“9203药品微生物试验室质量管理指导标准”。

4.验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检验。

5.适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制培养基均应进行培养基适用性检验。

6.验证周期：除另有要求外，在试验室中，若采取已验证配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基适用性检验试验能够只进行一次。假如培养基制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检验试验。

7.验证小组人员及职责：

小组人员职务

姓名

签字

所在部门

职务

组长

质量部

质量总监

组员

质量控制试验室

QC主任

组员

质量控制试验室

微生物QC

7.1验证小组人员:

7.2验证人员职责及要求

7.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

7.2.2认真观察并做好验证原始统计。

7.2.3对实施验证结果负责。

7.3验证中各部门职责

7.3.1验证领导组职责

7.3.1.1制订验证总计划，负责全企业验证工作管理。

7.3.1.2确定验证项目及验证项目责任人。

7.3.1.3负责验证方案同意工作。

7.3.1.4负责验证资料及结果审核工作。

7.3.1.5负责验证汇报同意工作。

7.3.2验证项目小组职责

7.3.2.1负责验证方案起草工作。

7.3.2.2参与验证方案讨论、确定工作。

7.3.2.3负责验证方案实施。

7.3.2.4负责验证结果分析、统计、汇报工作。

7.3.2.5参与验证结果评价工作。

7.3.3质量部职责

7.3.3.1负责企业验证日常管理工作。

7.3.3.2负责验证方案审核工作。

7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具校验工作。

7.3.3.4负责检验仪器及检验方法验证。

7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证检验统计、检验汇报，对验证过程中各项检验工作负责。

7.3.3.6负责对验证人员培训、考评工作。

7.3.3.7负责验证资料和汇报审核工作。

7.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。

8.合格标准：

8.1被检固体培养基上菌落平均数和对照培养基上菌落平均数比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应和对照培养基上菌落一致；

8.2被检液体培养基管和对照培养基管比较，试验菌应生长良好。

9.验证实施条件

9.1验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证人员进行验证方案和和验证相关文件进行培训，确保相关人员掌握了验证相关要求和知识。

9.2微生物程度检测室：检验所使用检测室应经过HVAC系统确定，并符合要求。

9.3检验用水：验证过程使用纯化水其制备系统应经过确定并符合要求，纯化水质量应经过检验并符合《中国药典》二部要求。

9.4检验仪器设备：验证包含检验仪器（设备）和检验方法，应经过技术监督局校验合格或企业确定/验证合格。

9.5验证菌种：验证所使用菌种，其种类和传代次数应符合《中国药典》相关要求。菌种情况见附件2:菌种确定。

10.验证过程

10.1菌液制备

10.1.1取经30-35℃培养18-24h铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-6-10-8，约为≤100cfu/ml菌悬液备用。

10.1.2取经20-25℃培养2-3天白色念珠菌、黑曲霉液体培养物1ml,加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-5-10-8，约为≤100cfu/ml菌悬液备用。

10.2试验操作

10.2.1胰酪大豆胨琼脂培养基：取11个无菌平皿，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（接种量≤100cfu），另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养，培养时间不超出3天（白色念珠菌、黑曲霉培养时间不超出5天），计数；被检培养基同法操作。

10.2.2胰酪大豆胨液体培养基：新鲜配制10ml/支对照胰酪大豆胨液体培养基7支，121℃灭菌15min，备用。取6支，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2支，每支接种1ml菌液（接种量≤100cfu），另1支不接种菌作为空白对照；被检培养