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病理科组织病理切片技术培训指南

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目录

01

培训概述

02

切片技术基础

03

切片制备流程

04

质量控制标准

05

安全与维护

06

评估与认证

01

培训概述

培训目标设定

掌握标准化操作流程

通过系统化培训，使学员熟练掌握组织病理切片的全流程技术，包括样本处理、切片制备、染色及封片等关键环节，确保操作规范性和结果准确性。

03

02

01

提升病理诊断支持能力

强化切片质量与病理诊断的关联性认知，帮助学员理解优质切片对诊断结果的影响，提高其为临床诊断提供可靠技术支持的能力。

培养问题解决能力

针对常见技术问题（如切片褶皱、染色不均等），通过案例分析及实操演练，培养学员独立分析原因并实施解决方案的能力。

培训对象范围

初级技术人员

面向刚进入病理科或缺乏系统培训的技术人员，重点夯实基础操作技能，如石蜡包埋、切片厚度控制及常规染色技术。

中级进阶人员

针对已有一定经验的技术人员，深化特殊染色技术（如免疫组化、荧光染色）及复杂样本（如骨组织、脂肪组织）的处理技巧。

质量控制人员

涵盖病理科质控专员，培训内容聚焦切片质量评估标准、误差溯源方法及标准化质控体系的建立与维护。

通过集中授课形式，涵盖组织病理学基础、试剂原理及设备维护等知识，采用多媒体教学与互动问答结合的方式强化理解。

培训时间安排

理论课程阶段

分批次安排实验室轮转，每位学员需独立完成至少50例样本的完整处理流程，由导师现场指导并实时纠正操作偏差。

实操训练阶段

设置理论笔试、实操评分及切片质量盲审三重考核机制，考核后汇总个性化改进建议，并安排一对一复盘会议。

考核与反馈阶段

02

切片技术基础

组织固定原理

固定时间与渗透速率

固定时间需根据组织类型和厚度调整，确保固定液充分渗透至组织中心，避免外层过固定而内层未固定的现象。

温度与pH值控制

固定过程需在室温下进行，pH值维持在7.2-7.4以最大限度减少人工假象，避免酸性环境导致组织收缩或硬化。

固定液选择与作用机制

常用固定液如中性缓冲福尔马林，通过交联蛋白质分子稳定组织形态，防止自溶和腐败，同时保持抗原性以支持后续免疫组化检测。

03

02

01

从低浓度酒精（如70%）逐步过渡至高浓度（如无水乙醇），彻底置换组织内水分，避免直接高浓度酒精导致组织收缩变形。

梯度酒精脱水流程

二甲苯等透明剂需完全取代酒精，使组织透明化便于石蜡渗透，操作时需在通风橱中进行以减少毒性暴露风险。

透明剂的使用与替换

熔融石蜡在真空条件下渗透组织，包埋时需注意组织定向（如肠管纵切面），确保切片时能完整展示关键结构。

石蜡浸渍与包埋技巧

组织脱水与包埋

切片机基本操作

刀片安装与角度校准

使用一次性刀片或玻璃刀，调整刀片倾角至5°-10°，减少切片时的阻力与震颤，避免组织撕裂或褶皱。

切片厚度控制

常规诊断切片厚度为4-6微米，特殊需求（如神经组织）可调整至2-3微米，需通过微调旋钮精确控制并定期校验厚度标尺。

防皱褶与展片技术

切片漂浮于温水浴（40-45℃）中展开，载玻片倾斜捞取以减少气泡，必要时使用蛋白甘油增强黏附力防止脱片。

03

切片制备流程

采用中性缓冲福尔马林等固定液对组织样本进行充分固定，随后通过梯度乙醇脱水去除水分，确保组织形态结构稳定。

固定与脱水处理

组织处理步骤

透明与浸蜡

包埋与修块

使用二甲苯等透明剂置换组织中的乙醇，再经熔融石蜡浸透，使组织具备适当的硬度和支撑性以便切片。

将浸蜡后的组织置于包埋盒中冷却固化，修整蜡块表面至平整，确保切片时组织完整暴露且无瑕疵。

切片厚度控制

将切片漂浮于40-45℃水浴中展开，用防脱载玻片捞取并烘干，确保组织平整贴附且无气泡残留。

水浴展片与贴附

烤片与脱蜡

将贴附的切片置于60℃烘箱中烤片，随后用二甲苯脱蜡，梯度乙醇复水，为后续染色步骤做准备。

使用旋转式切片机将蜡块切成4-5微米厚度的连续切片，需保持刀片锋利及切片角度稳定，避免出现褶皱或断裂。

切片与贴片技术

染色标准化方法

苏木精-伊红（HE）染色

依次进行苏木精核染色、分化返蓝、伊红胞质染色，使细胞核呈蓝色、胞质呈粉红色，便于病理诊断观察。

特殊染色技术

针对不同组织成分（如胶原纤维、黏液等）选用Masson三色、PAS等特殊染色，增强特定结构的显色对比度。

自动化染色流程

采用全自动染色机标准化操作，统一染色时间、温度及试剂浓度，减少人为误差并提高批次间一致性。

04

质量控制标准

切片厚度控制

标准化切片厚度参数

组织切片厚度应严格控制在3-5微米范围内，确保切片均匀性，避免过厚或过薄影响后续染色和诊断。

切片机校准与维护

定期对切片机进行校准和保养，检查刀片锋利度及样本夹持稳定性，确保切片厚度的一致性。

操作人员技能培训

加强技术人员对切片仪器的操作规范培训，包括