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ELISA技术原理及操作流程演讲人：日期:

目录CATALOGUE技术原理概述ELISA主要类型实验材料准备核心操作步骤显色与终止反应结果分析与质控

01技术原理概述PART

免疫反应基本原理抗原-抗体结合的可逆性抗原-抗体复合物在一定条件下可以解离，使抗原或抗体恢复游离状态。03抗原表位是指抗原分子上能被抗体特异性识别和结合的部位，抗体则特异性地识别并结合抗原表位。02抗原表位与抗体结合抗原-抗体反应ELISA技术基于特异性抗原与抗体之间的结合反应，通过形成抗原-抗体复合物来进行检测。01

酶标记物作用机制酶标记抗原或抗体ELISA技术中常用酶作为标记物，通过化学方法将酶与抗原或抗体结合，形成酶标记物。01酶催化底物显色酶标记物与底物反应，产生颜色变化，从而可以通过比色法检测目标抗原或抗体的存在。02酶标记物的放大作用酶标记物具有催化底物显色的能力，可以使微弱的抗原-抗体反应信号得到放大，提高检测的敏感性。03

信号检测与定量逻辑通过比较待测样本与标准品在相同条件下的颜色深浅来判断待测样本中目标抗原或抗体的含量。比色法检测定量曲线绘制数据分析与结果判定利用不同浓度的标准品与信号值之间的关系绘制定量曲线，通过待测样本的信号值在曲线上查找到对应的浓度。根据待测样本的信号值和定量曲线，计算出目标抗原或抗体的浓度，并依据设定的判定标准对结果进行判定。

02ELISA主要类型PART

原理直接ELISA法是通过将抗原或抗体直接固定在固相表面，加入待测样品中的抗体或抗原，使之与固相上的抗原或抗体结合，最后通过酶标抗体进行检测。直接ELISA法特征优点直接ELISA法操作简便、快速，适用于大批量样品的初步筛选。局限性该方法灵敏度相对较低，可能会出现假阴性结果，且仅适用于检测单一抗原或抗体。

间接ELISA法优势原理局限性优点间接ELISA法是通过将待测样品中的抗体或抗原先与一种特异性抗体结合，再加入酶标二抗进行反应，最后通过测定酶标抗体的活性来判断待测样品中抗体或抗原的含量。间接ELISA法具有较高的灵敏度，能够检测到低浓度的抗体或抗原，且可用于检测多种抗体或抗原。该方法操作相对复杂，需要制备高质量的二抗，且容易受到交叉反应的影响。

夹心ELISA法应用原理夹心ELISA法是通过将待测样品中的抗原夹在两种特异性抗体之间，其中一种抗体固定在固相表面，另一种抗体与酶标抗体结合，形成夹心复合物，最后通过测定酶标抗体的活性来判断待测样品中抗原的含量。优点应用范围夹心ELISA法具有较高的特异性和灵敏度，能够准确地检测样品中的特定抗原，且可用于定量检测。该方法广泛应用于疾病诊断、食品安全检测、环境监测等领域，特别是在病毒感染、肿瘤标志物检测等方面具有重要意义。123

03实验材料准备PART

试剂盒组成要素抗体抗原标记物缓冲液特异性抗体是ELISA技术中最关键的试剂，用于捕捉待测样本中的目标分子。用于建立标准曲线，确定待测样本中目标分子的浓度。通常为酶标记的抗体或抗原，用于检测抗原-抗体反应。用于稀释样本和试剂，维持反应体系的pH值和离子强度。

样本预处理要求样本类型血清、血浆、细胞培养上清等样本需进行适当预处理，以去除杂质和干扰物质。储存条件样本应在适当温度下储存，避免反复冻融，以免影响样本中的目标分子。样本处理样本需进行适当稀释，以保证目标分子在检测范围内，同时避免样本中的干扰物质对检测结果产生影响。

仪器校准标准仪器维护定期对仪器进行维护和保养，包括清洗、校准和更换部件等，以确保仪器处于最佳工作状态。03按照仪器说明书进行操作，包括设置标准曲线、进行背景扣除等步骤。02校准程序校准品使用已知浓度的标准品进行校准，以确保仪器测量结果的准确性。01

04核心操作步骤PART

将抗原或抗体固定在固相载体表面，如聚苯乙烯反应板，通过物理吸附或化学偶联方法进行。包被抗原或抗体的浓度需经过预实验确定，以保证检测的灵敏度和特异性。通常包被时间为4℃过夜或室温2小时，时间过短或过长均可能影响抗原或抗体的活性。用洗涤缓冲液洗涤反应板，去除未结合的抗原或抗体。包被固相抗原/抗体抗原或抗体包被选择合适的浓度包被时间包被后处理

孵育条件与时间控制孵育温度孵育时间孵育环境孵育后的洗涤根据抗原-抗体反应的特点，选择合适的孵育温度，通常为37℃或室温。孵育时间的长短对检测结果有较大影响，需根据实验要求进行调整，通常为1-2小时。孵育时需在湿盒中进行，以避免反应板干燥导致非特异性结合。孵育结束后，用洗涤缓冲液洗涤反应板，去除未结合的抗原或抗体。

洗涤缓冲液的选择洗涤次数和方式洗涤缓冲液需具备适宜的pH值和离子强度，以有效去除未结合的抗原或抗体。洗涤次数通常为3-5次，洗涤时需轻轻拍打反应板，确保洗涤液充分接触并洗去未结合物。洗涤去除未结合物洗涤后的处理洗涤后需用蒸馏水或去离