细菌病实验室诊断实训指南.pptxVIP

技能一细菌病的实验室诊断第二部分病料的采集、保存及运送

实训目的（一）了解病料采集的原则；（二）掌握采集病料的方法；（三）掌握病料的保存与运送。

实训内容病料的采集、处理、保存、运送等。

实训内容本课程培养动物传染病诊断、检疫、检测技术等岗位的职业关键技术能力和职业素养。

实训准备（包括理论准备、实训设备介绍等）畜禽细菌性传染病，除少数如破伤风等可根据流行病学，临床症状作出诊断外，多数还需借助病理变化进行初步论断。确诊则需在临床诊断的基础上进行实验室诊断，确定细菌的存在或检出特异性抗体，细菌病的实验室诊断需要在正确采集病料的基础上进行。理论准备

实训准备（包括理论准备、实训设备介绍等）仪器设备：保温箱、冰箱、离心机、高压灭菌器、恒温培养箱等。材料：病鸡（以健康鸡代替）、防护服（口罩、鞋套等）、一次性塑料手套、肥皂若干块、洗手盆、灭菌采样器械、灭菌样品袋、1.5mL灭菌离心管、记号笔、标签纸、试管架、烙铁、10mL灭菌注射器、灭菌棉签等。试剂：灭菌饱和盐水或30%甘油盐水缓冲保存液等。实训设备及材料

存在风险考虑到生物安全问题，以防出现病原菌污染环境或造成人的感染，本实验以健康鸡代替病鸡，通过空气栓塞法处死动物，并进行后续实验。

实训方法及步骤病料的采集要求进行无菌操作，所用器械、容器及其他物品均需事先灭菌，同时在采集病料时也要防止病原菌污染环境及造成人的感染。因此在尸体剖检前，首先将尸体在适当消毒液中浸泡消毒，打开胸腹腔后，应先取病料以备细菌学检验，然后再进行病理学检查。最后将剖检的尸体焚烧，或浸入消毒液中过夜，次日取出作深埋处理。剖检场地应选择易于消毒的地面或台面，如水泥地面等，剖检后操作者、用具及场地都要进行消毒或灭菌处理。必须在完成流行病调查和临床诊断的基础上，决定是否需要病理解剖，发现患畜（马、牛、羊及猪）有急性死亡时，则不可随意剖检。炭疽、马传贫、破伤风等严禁剖检。（2）无菌采病料原则（1）剖检前检查（一）病料采集的原则

实训方法及步骤（一）病料采集的原则病料必须采自含病原菌最多的病变组织或脏器。采集的病料不宜过少，以免在送检过程中细菌因干燥而死亡。病料的量至少是检测量的4倍。（4）病料含病原多的原则。病料一般采集于濒死或刚刚死亡的动物，若是死亡的动物，则应在动物死亡后立即采集，夏天不宜迟于6~8h，冬天不迟于24h。取得病料后，应立即送检。如不能立刻进行检验，应立即存放于冰箱中。若需要采血清测抗体，最好采发病初期和恢复期两个时期的血清。（3）适时采病料原则。（5）采病料适量的原则。

实训方法及步骤（二）病料采集的方法1.液体材料的采集方法破溃的脓汁、胸腹水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入无菌试管内,塞好胶塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1mL血液加3.8%枸橼酸钠0.1mL）。若需分离血清，则采血后（一定不要加抗凝剂)，放在灭菌的试管中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。方便时可直接无菌操作取液体涂片或接种适宜的培养基。

实训方法及步骤（二）病料采集的方法应在解剖尸体后立即采集。若剖检过程中被检器官被污染或剖开胸腹后时间过久，应先用烧红的铁片烧烙表面，或用酒精火焰灭菌后，在烧烙的深部取一块实质脏器（约1-2cm3大小），放在灭菌试管或平皿内，编好号。如剖检现场有细菌分离培养条件，直接以烧红的铁片烧烙脏器表面，然后用灭菌的接种环自烧烙的部位插入组织中，缓缓转动接种环，取少量组织或液体接种到适宜的培养基。2.实质脏器的采集方法

实训方法及步骤（二）病料采集的方法3.肠道及其内容物的采集方法肠道只需选择病变最明显的部分，将其中内容去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放在平皿内。粪便应采取新鲜的带有脓、血、黏液的部分，液态粪应采集絮状物。有时可将胃肠两端扎好剪下保存送检。

实训方法及步骤（二）病料采集的方法4.皮肤及羽毛的采集方法皮肤要取病变明显且带有一部分正常皮肤的部位。被毛或羽毛要取病变明显部位，并带毛根，放入平皿内。

实训方法及步骤（二）病料采集的方法5.胎儿可将流产胎儿及胎盘、羊水等送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检。

实训方法及步骤（三）病料的保存采取病料后要及时送实验室检测，如病料不能立即进行检测，或须送往外地检验时，应加入适量的保存剂，使病料尽量保持新鲜状态，以便得出正确的结果。

实训方法及步骤（三）病料的保存蒸馏水100mL，加入氯化钠38-39g，充分搅拌溶解后，用数层纱布滤过，高压灭菌备用。饱和盐水配制01纯净甘油300mL，氯化钠4.2g，?磷酸氢二钾3.1g，磷酸二氢钾1.0g，0.02%酚红1.5ml，蒸馏水加至1000mL，pH7.6，混合后高压灭菌备用。?30%甘油盐水缓冲液的配制??021.细菌检测材料的保