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微生物检验操作规定

**一、总则**

微生物检验是确保产品质量、食品安全及环境安全的重要手段。本规定旨在规范微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。所有参与检验的人员必须严格遵守本规定，熟悉相关设备操作，并保持良好的实验室习惯。

**二、检验前的准备**

（一）人员准备

1.检验人员需经过专业培训，掌握无菌操作技术。

2.操作前需洗手消毒，穿戴洁净工作服、口罩和手套。

3.确保人员健康状况良好，无传染性疾病。

（二）设备与试剂准备

1.检查培养箱、显微镜、天平等设备是否运行正常。

2.确认培养基（如琼脂平板、肉汤培养基）是否在有效期内，且配制符合标准。

3.准备无菌水、生理盐水等辅助试剂，确保无污染。

（三）样品准备

1.样品采集需使用无菌工具，避免污染。

2.样品数量应符合检验要求，通常为10g或10mL。

3.样品采集后应立即冷藏保存，检验前置于室温平衡30分钟。

**三、检验操作流程**

（一）样品处理

1.**称量样品**：使用无菌天平称取规定量的样品，置于无菌容器中。

2.**稀释样品**：根据样品类型选择合适的稀释液（如生理盐水），进行系列稀释。

3.**均匀涂布**：取适量稀释液，在琼脂平板表面均匀涂布，确保覆盖整个表面。

（二）培养与观察

1.**培养**：将平板倒置放入培养箱，设置温度（如37℃）和湿度，培养时间通常为24-48小时。

2.**计数**：培养后观察平板上的菌落，使用菌落计数法（如平板法、显微镜法）计算菌落数。

3.**记录**：详细记录菌落数、菌落形态等信息，并拍照存档。

（三）结果分析

1.**对比标准**：将检验结果与国家标准或企业标准进行对比，判断样品是否符合要求。

2.**复核**：若结果异常，需重新检验确认。

3.**报告**：检验完成后，撰写检验报告，包含样品信息、检验方法、结果及结论。

**四、注意事项**

（一）无菌操作

1.所有接触样品的器械必须灭菌处理。

2.操作台面需定期消毒，避免杂菌污染。

（二）安全防护

1.操作时避免手部直接接触样品。

2.使用化学试剂（如消毒液）时需佩戴护目镜和手套。

（三）废弃物处理

1.检验后的培养基和样品需高温高压灭菌后处置。

2.废弃物分类存放，避免交叉污染。

**五、附则**

本规定适用于所有微生物检验工作，检验人员需定期参与内部培训，更新操作技能。如有疑问，可咨询实验室负责人。

**二、检验前的准备**

（一）人员准备

1.检验人员需经过专业培训，掌握无菌操作技术，包括手部消毒、穿戴防护用品、使用无菌器材等基本技能。培训内容应涵盖实验室生物安全等级、标准操作规程（SOP）、常见微生物特性及检验原理。

2.操作前需彻底洗手消毒，遵循七步洗手法，使用含70%-75%酒精的消毒液或抗菌肥皂清洗至少20秒。穿戴洁净工作服、一次性口罩和手套，确保无毛发外露，避免头发或衣物污染检验环境。

3.确保人员健康状况良好，无传染性疾病，定期进行体检，符合实验室生物安全要求。操作时需保持专注，避免交谈或随意走动，减少气溶胶传播风险。

（二）设备与试剂准备

1.检查培养箱、显微镜、天平、高压灭菌锅等设备是否运行正常。培养箱需校准温度控制精度，确保恒温环境稳定（如厌氧培养箱需检测氧气含量和CO2浓度）。显微镜需清洁物镜和载物台，检查光源亮度。天平需校准零点，确保称量准确。高压灭菌锅需测试压力和温度参数，确保灭菌效果。

2.确认培养基（如营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、TSB肉汤培养基）是否在有效期内，且配制符合标准。检查培养基的凝固性、颜色和透明度，不合格者不得使用。配制过程中需使用无菌水，并精确控制pH值（如营养琼脂pH7.2-7.4）。

3.准备无菌水、生理盐水（0.9%氯化钠溶液）、缓冲液（如PBS）等辅助试剂，确保无微生物污染。使用无菌容器储存，置于阴凉干燥处。必要时对试剂进行灭菌处理（如高压灭菌）。

（三）样品准备

1.样品采集需使用无菌工具，如无菌剪刀、镊子、采样棉签等，避免污染。采集表面样品时，采用旋转方式均匀擦拭，避免深挖。采集液体样品时，使用无菌吸管或注射器，避免混入杂质。

2.样品数量应符合检验要求，通常为10g（固体样品）或10mL（液体样品）。样品应具代表性，如固体样品需从不同部位多点采集。采集后立即置于无菌容器中，密封保存。

3.样品采集后应立即冷藏保存（如4℃），避免微生物过度繁殖。检验前需置于室温平衡30分钟，使样品温度与实验室环境一致，减少梯度影响。特殊样品（如厌氧菌）需采用专用采集工具和运输系统。

**三、检验操作流程**

（一）样品处理

1.**称量样品**：

(1)打开超净工作台或生物安全柜，启动紫外灯照射30分钟消毒，关闭紫外灯后开启通风。