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基于人单核细胞系U937构建抗流感药物筛选模型及其应用探究

一、引言

1.1研究背景与意义

流感作为一种由流感病毒引发的急性呼吸道传染病，在全球范围内广泛传播，严重威胁人类健康。据统计，全球每年流感病例高达6亿-12亿，其中重症流感为300万-500万例，死亡人数约25万-50万，重症流感病死率可达8％。流感病毒主要通过病人咳嗽、喷嚏等飞沫直接传播，发病三天内传染性最强，潜伏期短，约1-2天。感染流感病毒后，患者症状轻重不一，轻者仅觉全身不适，持续1-2天；重者畏寒高热，体温可达39-40摄氏度，伴有四肢腰背酸痛、头痛等全身中毒症状。临床上，流感分为单纯型、胃肠型、肺炎型和中毒型。单纯型最为常见，主要症状为发热、畏寒、头痛、全身酸痛、乏力等；胃肠型会出现腹痛、腹胀、呕吐等消化道症状；肺炎型表现为肺炎，严重时可因呼吸衰竭导致死亡，年老体弱患者容易出现；中毒型则有全身毒血症表现，严重时会出现休克、弥散性血管内凝血、循环衰竭甚至死亡。对于儿童、老年人和有基础疾病的人群，流感甚至可能引发肺炎、心肌炎等严重并发症，危及生命。孕妇、术后康复者或其他免疫力低下的人群，一旦感染流感病毒，病情往往更为严重，治疗难度也更大。

目前，临床使用的抗流感病毒药物主要有两类：流感病毒M2离子通道抑制剂，如金刚烷胺和金刚乙胺；流感病毒神经氨酸酶抑制剂，如奥司他韦和扎那米韦。然而，金刚烷胺的耐药性已广泛存在，奥司他韦也开始出现部分毒株耐药的情况。并且，针对流感感染所造成的免疫失调和“细胞因子风暴”，临床上缺乏非常对症的药物。传统的甾体类抗炎药物（如皮质激素类药物）在流感感染中作用不佳，甚至可能加重病情；传统的非甾体类抗炎药物（如环氧酶2（COX-2）抑制剂）在动物实验中也被证明无法针对流感提供有效的保护。因此，开发新型抗流感病毒药物以及能有效控制流感炎症的新型免疫调理药物迫在眉睫。

在抗流感药物研发过程中，药物筛选模型起着关键作用。当前针对流感病毒的药物筛选模型主要分为分子水平、细胞水平和动物水平。分子水平筛选模型以流感病毒某个蛋白为模板，通过体外表达病毒蛋白，以其功能为靶标筛选抑制该功能的化合物，但该方法脱离生物活动正常环境，无法真实、系统地评价化合物的毒性、活性、代谢等特性。动物水平筛选模型虽能反映药物在体内的整体效果，但成本高、耗时久、通量低，不适于大规模、高通量药物筛选。细胞水平筛选模型成本较低、操作简便易行、实验周期短、结果较为全面可靠，更适合高通量药物筛选。然而，现有的细胞筛选模型存在诸多不足：检测指标单一，抗流感病毒筛选模型和抗炎筛选模型相互独立，无法系统评价药物在流感及其引发炎症中的综合效果；敏感性不高，一些传统炎症细胞模型对流感不敏感，而流感敏感型细胞株（如MDCK细胞系，犬类肾细胞系）与人源细胞存在差距，临床参考意义有限；针对性不强，一些传统炎症细胞模型所能检测的指标在流感引发的炎症中作用不大。

人单核细胞系U937作为人源单核细胞系，从流感病理角度和种属性角度都更贴近体内真实情况。它对不同流感毒株具有较好的敏感性，在流感病毒刺激下可释放许多重要炎症因子。基于U937构建抗流感药物筛选模型，有望克服现有细胞筛选模型的缺陷，为新型抗流感药物的研发提供更有效的工具，对于控制流感疫情、保障公众健康具有重要意义。

1.2国内外研究现状

在国外，针对基于U937细胞系筛选抗流感药物的研究已有一定进展。部分研究聚焦于U937细胞对不同流感毒株的感染特性及炎症因子释放规律，发现U937细胞能被多种流感病毒高效感染，并诱导如MCP-1、IP-10、IL-8、IL-6等一系列重要炎症因子的表达。在此基础上，一些研究尝试建立基于U937细胞的药物筛选方法，通过检测感染细胞活力、上清中病毒水平及相关炎症因子水平，来评价药物的毒性、抗病毒及抗炎活性。然而，这些研究在模型的标准化和优化方面仍存在不足，不同实验室的实验条件和检测指标差异较大，导致结果的可比性和重复性受限。

国内相关研究也在逐步开展。一些科研团队致力于探索U937细胞在抗流感药物筛选中的应用潜力，通过优化实验流程和检测方法，提高模型的稳定性和可靠性。例如，有研究采用声波移液系统（Echo）将待筛选化合物打入无菌384孔板中，结合U937细胞与流感病毒混合培养，建立了单核细胞病毒复制模型及流感病毒诱导的炎症模型，实现了在一轮实验中全面评价药物的多种活性。但整体而言，国内研究在深度和广度上与国外仍有一定差距，尤其在模型的临床转化应用方面，缺乏足够的研究数据支持。

此外，目前国内外对于基于U937细胞系筛选抗流感药物的研究，大多集中在单一药物的