邻二氮菲法测定铁吸收曲线实验.docxVIP

《仪器分析技术》课程-微教材

微课编号

W3501

微课名称

绘制标准溶液的吸收曲线

所属模块

可见分光光度分析技术

子模块

实训3.3：邻二氮菲法测定铁离子—标准曲线的制作及定量

关键词

吸收曲线；最大吸收波长；

是否通用

√通用农产品食品

是否重点建设

√是否

微课类型

讲授型；实验实训型

微课形式

PPT录屏+实地拍摄式

教学设计模式

任务驱动法

教学目标

了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法

掌握分光光度法绘制标准溶液吸收曲线的步骤及方法

了解721E型（或其他型号）分光光度计的构造和使用方法

教学内容

知识点

技能点

无

1.不同波长下，标准溶液吸光度的测定及最大吸收波长的确定

2.标准溶液吸收曲线的制作

知识讲解

光度法测定的条件

分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液温度、显色时间及干扰物质的消除方法等;测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。

测定原理

在PH=2-9的条件下，Fe2+与邻二氮杂菲（o-ph）生成极稳定的橘红色配合物，反应式如下：

此配合物的lgK稳=21.3摩尔吸收系数ε510=1.1×104

在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe2+还原成Fe3+.其反应式如下：

2Fe3++2NH2OH·HC1＝2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2C1-

测定时，控制溶液酸度在PH=5左右较为适宜。酸度过高时，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。

边学边练

任务：邻二氮菲法测定微量铁，绘制标准溶液吸收曲线。

邻二氮菲法测定铁的条件实验

吸收曲线的测绘准确吸取20μg·mL-1铁标准溶液5mL于50mL容量瓶中，加入5%盐酸羟胺溶液1mL，摇匀，加入1mol·L-1NaOAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲溶液3mL。以水稀释至刻度，摇匀。放置10min，在722型分光光度计上，用1cm比色皿，以水为参比溶液，波长从570nm到430nm为止，每隔10nm测定一次吸光度。如图1所示，其最大吸收波长为510nm，故该实验选择测定波长为510nm。

邻二氮杂菲-亚铁配合物的稳定性

用上面溶液继续进行测定，其方法是在最大吸收波长510nm处，每隔一定时间测定其吸光度，及再加入显色剂后立即测定一次吸光度，经10、20、30、120min后，再各测一次吸光度。

（3）显色剂浓度实验取50mL容量瓶7只，编号。每只容量瓶中准确加入20ug·mL-1铁标准溶液5mL以及1mL5%盐酸羟胺溶液，经2min后。再加入5mL1mol·L-1NaOAc溶液，然后分别加入0.1%邻二氮杂菲溶液0.3mL、0.6mL、1.0mL、1.5mL、2.00mL、3.0mL和4.0mL，用水稀释至刻度，摇匀，在分光光度计上，用最大吸收波长510nm、1cm比色皿，以水为参比，测定上述溶液的吸光度。

吸收曲线的测绘

（1）数据纪录

波长

吸光度A

570

550

530

520

510

500

490

470

450

430

0.067

0.152

0.345

0.428

0.454

0.440

0.426

0.402

0.343

0.297

（2）作吸收曲线图

讨论：从曲线可以看出，在一定范围内，当波长较小时，随波长增加吸光度增加。测定的适宜波长是510nm。

邻二氮杂菲亚铁配合物的稳定性

放置时间

0

5

10

15

20

稳定性

0.389

0.390

0.389

0.389

0.389

讨论：从曲线可以看出，配合物稳定性较好。

显色剂用量的测定

容量瓶号

显色剂量/mL

吸光度A

1

2

3

4

5

6

7

0.3

0.6

1.0

1.5

2.0

3.0

4.0

0.125

0.235

0.386

0.418

0.428

0.415

0.424

讨论：当显色剂较小时，随显色剂含量增加吸光度增加，当加入显色剂为1.5ml吸光度最大。所以显色剂的适宜加入的量为1.5ml