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电泳技术全面总结

电泳技术简介

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核甘酸等）在惰性支持介质（如、醋酸纤维素、琼脂精凝胶、

聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭

窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或il•算其百分含量的方法。

电泳技术的基本原理和分类

在电场中，推动带电质点运动的力F（）等于质点所带净电荷量Q（）与电场强度E（）的乘积。F=QE质

点的前移同样要受到阻力F（）的影响，对「一个球形质点，服从Stoke定律，即：F=6rnv式中r

为质点半径，Q为介质粘度，v为质点移动速度，当质点在电场中作稔定运动时：F=F即QE=6nrn

v可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。

除了自身状态的因索外，电泳体系中其它因索也影响质点的电泳迁移率。

电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微战电泳、显

微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳•区带电泳则包括游电泳常（压及高压）、薄层电冰

（•前膜及薄板）、凝胶电泳琼（脂、琼脂楠、淀粉股、聚丙烯酰胺凝胶）等。

自由电泳法的发展并不迅速，困为其电泳仪构造夏杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电

泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛.本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。

影响电泳辽移率的因素

1.电场强度电场强度是指单位长度c（m）的电位降，也称电势梯度。如以谑作支持物，其两端浸入到

电极液中，电极液与滤交界面的长为20cm,测得的电位降为200V,那么电场强度为200V/20cm=1

OV/cm.当电压在00V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳.电压在00V以上，电场强度在20-

200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷

却装叁以维持恒温。

2.溶液的pH值溶游的pH决定被分感物质的解离狎理和质点的带中.性后及所带净中荷珏。例半白质分

子，它是既有酸性基团-（COOH）,又有碱性基团-（NH2）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷

相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点

i（soelctricpoint,pl）«若溶液pH处于等电点场侧，即pHvpl,则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移

动。若溶液pH处『等电点碱侧，即pHpl,则蛋白质带负电荷，向正板移动。溶液的pH离pl越远，质

点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。

3.溶液的离子强度电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低，其原因是带电质点吸引相反符合

的离子聚集其周围，形成•个与运动质点符合相反的离子氛(ionicatmosphere),离子氛不仅降低质点

的带电鼓，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及

缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和

价数相关。可用离子强度I表示。4.电港在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗(electr

o-osmosis)»其产生的悚因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或

负离子，使溶液相对带负电或正电。以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH-带负电荷，与纸接触的水

溶液因产生H3O+,带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速

度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减

少电渗的影响。

电泳分析常用方法

(-)醋酸纤维素薄膜电泳

醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸