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高效液相色谱培训讲义

高效液相色谱培训讲义一（）

第一章绪论

色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一重要分支，从本世纪初俄国植物学家茨维特（M.S.Tswett）提出经

典液相色谆法后，色谱分析法取得迅速发展，30〜40年代发展了柱分配色谱、纸色谱；50年代发展了气相色谱法，薄

层色谱法：60年代发展/凝胶色谱法及高效液相色谱法；70年代发展了高效毛细管气相色谱法；80年代发展了毛细管

电泳和电色谱：90年代又出现了光色谱。

所有二述各种色谱技术的发展过程，都表明了色谱分析法是一具有强大生命力的分离分析技术。

第一节高效液相色谱法的特点

作为色谱分析法的一分支，高效液相色谱法是在本世纪60年代末期，在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上,

发展起来的新型分离分析技术。液相色谱包括传统的柱色谱、薄层色谱和纸色谱。5（）年代后气相色谱法在色谱理论研

究和实验技术上迅速崛起。而液相色谱技术仍停留在经典操作方式，其操作繁琐，分析时间冗长，因而未受到垂视。

60年代以后，随着气相色谱法对高沸点有机物分析局限性的逐渐显现，人仅又重新认识到液相色谱法可弥补气相色谱

法的不足之处。60年代末随着色谱理论的发展，色谱工作者已认识到采用微粒固定相是提高柱效的重要途径，随着微

粒固定相的研制成功，液相色谱仪制造商在借鉴了气相色谱仪研制经验的基础上，成功地制造了高压输液泵和高灵敏

度检测器，从而使液相色谱法获得新生。

从分析原理上讲，高效液相色谱法和经典液相柱（）色谱法没有本质的差别，但由于它采用了新型高压输液泵、高

灵敏度检测器和高效微粒固定相，而使经典的液相色谱法焕发出新的活力。经过近30年的发展，现在高效液相色谱法

在分析速度、分离速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了和气相色谱法相媲美的程度，并保持了

经典液相色谱对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多和便于用作制备色谱等优点。至今，高效液相色谱法已在

生物工程、制药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域获得广泛的应用。

向效液相色谱H（ighPerformanceLiuidChromatography）还可称为向压液相色谱H（ighPressureLiuid

Chromatography）高速液相色谱（HighSpeedLiuidChromatography）或现代液相色谱（Modernl.iuid

Chromatography）。

一、与经典液相柱（）色谱法比较

经典液相柱（）色谱法使用粗粒多孔定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在

定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。

高效液相色谱法使用了全多孔微粒定相，装填在小口径，短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的

色谱柱，涔质在定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。

经典液相柱（）色谱法和高效液相色谱法的比较可见表17。

表1T高效液相色谱法与经典液相柱（）色谱法的比较

高效液相色谱法经典液相柱（）色谱法

项目

色谱柱：柱长/cm10〜2510〜200

柱内径/mm2-1010〜50

定相粒度：粒径/4m5-5075〜600

筛孔/目2500〜30020。〜30

色谱柱入口压力/MP±2〜200.001〜0.1

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