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检验科病原菌培养技术指南

CATALOGUE

目录

01

概述与基础原则

02

样本处理流程

03

培养基准备

04

培养技术操作

05

鉴定与分析方法

06

质量控制与安全

01

概述与基础原则

目的与适用范围

通过培养技术分离和鉴定临床样本中的病原菌，为感染性疾病提供准确的病原学依据，指导临床治疗和用药选择。

明确病原学诊断

规范实验室操作流程，确保培养结果的可靠性和重复性，减少人为误差和交叉污染风险。

质量控制与标准化操作

适用于血液、尿液、痰液、脑脊液等各类临床样本的细菌、真菌及部分苛养菌的分离培养，涵盖院内感染监测和公共卫生事件调查。

适用范围

01

02

03

革兰氏阳性菌

如大肠埃希菌、铜绿假单胞菌等，需关注其氧化酶试验、糖发酵能力及耐药表型，部分菌种需特殊培养基（如麦康凯琼脂）分离。

革兰氏阴性菌

厌氧菌与真菌

拟杆菌属、白色念珠菌等需在厌氧环境或沙保弱培养基中培养，并辅以显微镜检和生化鉴定。

包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等，需根据菌落形态、溶血特性及生化反应进行鉴别，部分菌株需结合分子生物学方法确认。

常见病原菌分类

无菌操作规范

培养基选择与优化

样本采集、转运及处理需严格遵循无菌原则，避免环境或操作者污染，使用生物安全柜降低气溶胶风险。

根据目标病原菌特性选择血琼脂、巧克力琼脂等基础培养基，必要时添加选择性抑制剂（如万古霉素）提高检出率。

基本技术要求

培养条件控制

需精确调节温度（如35-37℃）、湿度及气体环境（需氧/厌氧/微需氧），部分苛养菌需补充CO2或特殊营养成分。

结果判读与质控

定期使用标准菌株（如ATCC系列）验证培养基性能，结合自动化仪器与人工判读提高准确性。

02

样本处理流程

采集方法与规范

采样时机控制

在患者症状明显或使用抗生素前采集样本，避免药物干扰病原菌生长，同时需记录患者临床信息以辅助结果解读。

03

根据疑似感染部位选择最佳采样点（如血液、尿液、痰液、伤口分泌物等），并确保采集足够量的样本以提高病原体检出率。

02

采样部位选择

无菌操作原则

采集样本时必须严格遵循无菌操作规范，使用一次性无菌容器或专用采样工具，避免环境或操作者污染样本，确保检测结果的准确性。

01

运输时间与温度

对脆弱病原体（如厌氧菌、淋球菌等）需使用含保护剂的专用运输培养基，维持病原体存活率并抑制杂菌过度繁殖。

专用运输培养基

生物安全包装

运输过程中需使用防漏、防震的生物安全容器，并标注生物危害标识，确保运输人员及环境安全。

样本需在采集后尽快送检，若延迟运输需根据病原体特性选择适宜储存条件（如冷藏或室温），避免样本变质或病原体失活。

运输与储存要求

预处理步骤

样本均质化处理

对黏稠样本（如痰液、组织）需进行均质化或稀释处理，以释放病原体并提高培养均匀性，必要时加入消化酶辅助分解。

选择性增菌培养

对低菌量样本（如脑脊液、胸腹水）需通过离心浓缩病原体，再接种于平板培养基，增强分离效果。

针对特定病原体（如沙门氏菌、结核分枝杆菌）需预先接种于增菌培养基，抑制杂菌生长并提高目标菌检出率。

离心浓缩技术

03

培养基准备

常用培养基类型

营养琼脂培养基

适用于大多数非苛养菌的分离培养，含有基础营养成分如蛋白胨、牛肉浸粉和氯化钠，支持细菌广泛生长。

血琼脂培养基

在基础培养基中添加5%-10%脱纤维羊血，用于培养苛养菌（如链球菌、肺炎球菌）及检测溶血特性。

麦康凯琼脂培养基

选择性鉴别肠道杆菌，含胆盐抑制革兰阳性菌生长，乳糖发酵菌落呈粉红色，便于初步鉴定。

沙保弱葡萄糖琼脂培养基

专用于真菌培养，低pH环境抑制细菌生长，添加氯霉素可进一步减少细菌污染风险。

按厂商说明书称量干粉培养基，使用纯化水溶解并充分搅拌，避免结块影响成分均一性。

调整培养基pH至规定范围（如7.2±0.2），分装至适宜容器（试管或培养皿），标注批号与有效期。

采用121℃、15psi高压灭菌15-20分钟，确保杀灭芽孢；热敏感成分（如血液、抗生素）需过滤除菌后无菌添加。

定期使用生物指示剂（如嗜热脂肪芽孢杆菌）测试灭菌程序有效性，确保无菌状态。

配制与灭菌标准

精确称量与溶解

pH校准与分装

高压蒸汽灭菌

灭菌效果验证

质量验证方法

随机抽取5%灭菌后培养基置于35℃培养48小时，确认无微生物生长方可使用。

无菌性测试

接种标准菌株（如大肠埃希菌ATCC25922），观察菌落形态、大小及生长速度是否符合预期。

详细记录培养基配制参数、灭菌条件及质控结果，保存至有效期后至少一年以备审计。

生长性能测试

在选择性培养基上接种目标菌与非目标菌，评估抑制与促生长效果（如麦康凯琼脂上大肠埃希菌生长而金黄色葡萄球菌被抑制）。

选择性验证

01

02

04

03

批次记录与追溯

04

培养技术操作

需氧与厌氧培养设置

需氧