光合细菌分离培养.docx

光合细菌菌种分离、保藏

???培养光合细菌首先要有菌种。目前，应用于水产养殖业的光合细菌，主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基，和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。

???（一）采样

???红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，广泛分布在被有机物污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业

等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品，深水处借用采水器和采泥器采样。

???（二）富集培养

???富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，倒入配制好的培养液，充分搅拌。为造成厌气环境，在玻璃圆筒或大型

试管中加入液体石蜡以隔断空气。然后在温度为25～35℃，光照为5000～10000lx的条件下进行富集培养，经过2～8周的培养，在玻璃瓶壁上出现光合细菌菌落，或整个培养液长成红色。如果培养的光合细菌是海水种，因其生长缓慢则需要更长的富集时间。

???如果富集培养初步获得成功，就用吸管插入菌液中或光合细菌大量繁殖的泥层中，将菌液吸入具塞的磨口玻璃瓶中，加入培养液继续进行光照；厌气培养。反复多次后，光合细菌

压倒其他细菌而占绝对优势，培养液吴深红色．这时富集培养成功。为了避免培养液中藻类和绿杆菌科细菌的生长繁殖，可用滤光片，使波长为800nm或更长波长的光透过，可以更有效地达到富集紫色非硫细菌的目的。

此外，培养紫色非硫细菌时，用含氯化物的培养基比用合硫酸盐的培养基效果好。

（三）分离方法

富集培养成功后可进行分离培养。淡水生长的紫色非硫细菌生长速度较快，在1周左右移植比较合适，而海水生长的紫色非硫细菌生长速度较慢，培养3周以上才能移植。先配制固体培养基，灭菌后浇成平板。将富集培养成功的菌液适当稀释，在平板划线，然后在厌气、光照条件下培养。培养温度为25～35℃，光照为2000～3000lx，培养2～7天左右，就能长出光合细菌菌落。仔细挑取单菌落，继续用上述方法分离培养。反复多次，便能得到紫色非硫细菌的纯培养物。