《发酵工程》第2章.PPTVIP

*2淘汰野生型抗生素法：野生型能在MM中生长，而缺陷型不能，于是将诱变处理液在MM中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于休眠状态。由于细菌或酵母对一些抗生素敏感，于是就相应加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制霉菌素。菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺陷型孢子却因未发芽而不能滤过。*3检出缺陷型原理：在固体MM培养基和CM培养基上，生长情况完全不同，缺陷型在CM上生长良好，而在MM上则不生长，野生型都能生长。具体方法：影印法、点种法、夹层法*1.将一较平皿直径小1cm的金属圆筒蒙上一层灭菌的丝绒，用金属夹夹住，灭菌。2.将完全培养基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻一压，使之成为印模，标记方位。3.将基本培养基平皿和完全培养基平皿在标记的同一方位上先后轻轻一压，此菌印模即复印于上。4.将CM和MM在恒温箱中培养。5.二平皿相同方位进行比较,即可发现在MM平皿上长出的菌落少于CM平板上的。MM上未长而相应于CM上长出的那几个菌落就可能是缺陷型。此法要求平皿上菌落不能太多，菌落之间应有一定间隔。(1)影印法*(2)点种法也就是任意法。用接种针或牙签将CM上长出的菌落在MM和CM两副平板上接种，依次在相应位置点种，然后一起培养，观察其生长情况。此法结果明确，但工作量大。*(3)夹层法先在培养皿上倒一层基本琼脂培养基，凝固后涂上一层含菌的MM，凝固后再倒一薄层MM琼脂培养基，培养24h，将出现的菌落标记，然后倒上一层CM琼脂培养基，再培养。这时第二批长出的菌落就可能是缺陷型。此法缺点是，结果有时不明确，而且将缺陷型菌落从夹层中挑出并不很容易。*4营养缺陷型生长谱的确定验证确定是缺陷型后，就需确定其缺陷的因子，即生长谱测定。生长谱测定的方法将缺陷型菌株培养后，收集菌体，制备成细胞悬液，与MM培养基(融化并凉至50℃)混合并倾注平皿。待凝固后，分别在平皿的5～6个区间放上不同的营养组合的混合物或吸饱此组合营养物的滤纸圆片。培养后会在某组合区长出，就可测得所需营养。—个平皿测一个菌。以不同组合的营养混合物与融化凉至50℃的MM培养基混合铺成平皿，然后在这些平皿上划线接种各个缺陷型菌株于各相应位置，培养后根据在这些组合长出可推知其营养因子。在5～6个平皿上可测20株菌以上。*抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变菌株的筛选未突变的菌株：代谢受阻，不能合成某种产物而死亡；抗反馈调节突变株：在结构类似物存在的情况下，仍能合成末端产物形成菌落。抗阻遏和抗反馈突变型都是由于代谢失调所造成的，在细胞中已经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。选育结构类似物抗性突变株结构类似物是指一些和细菌体内氨基酸、嘌呤、维生素等代谢产物结构相类似的物质主要用于末端产物的积累*组成型突变株的筛选诱导酶的生产需要诱导物，而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响。能迅速利用的碳源（如葡萄糖）会引起酶合成的减少，诱导物有时又比较昂贵。生产成本提高控制酶合成的调节基因发生了变异诱导酶转变成组成型酶*组成型突变株的筛选恒化器法：恒化器常被用于微生物的“驯化”，添加不能起诱导作用的低浓度底物，缓慢生长。循环培养法：利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液，从而使组成酶变异株得到富集。诱导抑制剂法：加入某些诱导抑制剂阻止相应的某些诱导酶的合成。显色反应法：即用不含诱导物的平板培养菌株，而后加入适当的底物（常用经酶解后有颜色变化的底物），以便快速检测出组成型菌落。筛选*抗性突变株的筛选抗生素抗性突变在抗生素产生菌选育中，通过筛选抗生素抗性突变可提高抗生素产量。抗生素抗性突变株除能提高抗生素的产量外，还能提高其它代谢产物的量。抗噬菌体菌株的选育先诱变处理，再用高浓度的噬菌体平板筛选抗性菌株。*抗性突变株的筛选条件抗性突变（条件致死突变）敏感突变菌株突变后在特定条件下能生长，而在原来条件下不能繁殖而被致死；而野生型在两种温度均能增殖。最主要的是温度敏感突变株，其常可提高产物的产量。突变株对某些抑制剂等物质更加敏感，而对野生型没什么大的影响。*五、杂交育种将不同菌株的遗传物质进行交换、重组，使不同菌株的优良性状集中在重组体中，得到具有新性状的菌株。特点：具有定向育种的目的，可以改变产品的质量和产量，甚至形成新的品种；但该技术操作复杂，技术条件要求较高