第十章 吸光光度法.PPTVIP

光源白炽钨灯1发出光（360-800nm），经聚光镜2后射向反射镜3，偏转90。后在狭缝4附近形成灯丝像。经狭缝直接射向准直镜5，后，以一束平行光射向棱镜6，在其中色散。当入射角在最小偏向角时，某一波长的单色光在棱镜背面反射后便依原路返回，仍通过准直镜会聚在狭缝上，再通过小聚光镜7、比色皿8光门9打开时，便最终进入光电管10，产生光电流。仪器就是通过光电流的测定来间接测量透射光的变化，从而测定溶液的浓度。单光束分光光度计常见的有721、722、751、755等型号。751型分光光度计是一种波长范围较宽(200-1000nm)、精密度较高的分光光度计。由光源(钨丝灯或氢灯)发出的光线由反射镜反射，使光线经狭缝的下半部，经准光镜进入单色器棱镜色散底，由准光镜将光聚焦于狭缝上半部而射出，经液槽照射于光电管上。由此可见，仪器用同一狭缝作入光和出光狭缝，它们始终具有相同的宽度。棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。波长200-320nm范围用氢灯作光源，波长320-1000nm范围用钨丝灯作光源。波长200-625nm用蓝敏光电管(GD-5)测量进射光强度，波长625-1000nm用红放光电管(GD-6)测量透射光强度。吸光度和透光度刻在读数电位差计转盘上，而电流计起示零作用。单光束分光光度计一、显色反应及其条件的选择（一）显色反应和显色剂1.显色反应在分光光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的反应叫显色反应。与被测组分化合成有色物质的试剂称为显色剂。显色反应可分两大类，即络合反应和氧化还原反应，而络合反应是最主要的显色反应。§10-4吸光光度法分析条件的选择选择显色反应的一般标准:(1)选择性要好。一种显色剂最好只与一种被测组分起显色反应，这样干扰就少。或者干扰离子容易被消除、或者显色剂与被测组分和干扰离子生成的有色化合物的吸收峰相隔较远。(2)灵敏度要高。由于吸光光度法一般是测定微量组分的，灵敏度高的显色反应有利于微量组分酌测定。灵敏度的高低可从摩尔吸光系数值的大小来判断，κ值大灵敏度高，否则灵敏度低。但应注意，灵敏度高的显色反应，并不一定选择性就好，对于高含量的组分不一定要选用灵敏度高的显色反应。(3)对比度要大。即如果显色剂有颜色，则有色化合物与显色剂的最大吸收波长的差别要大，一般要求在60nm以上。(4)有色化合物的组成要恒定,化学性质要稳定。有色化合物的组成若不确定，测定的再现性就较差。有色化合物若易受空气的氧化、日光的照射而分解，就会引入测量误差。(5)显色反应的条件要易于控制。如果条件要求过于严格，难以控制，测定结果的再现性就差。选择显色反应的一般标准:2.显色剂(1)无机显色剂许多无机试剂能与金属离子起显色反应，如Cu2+与氨水形成深蓝色的络离子Cu(NH3)42+，SCN-与Fe3+形成红色的络合物Fe(SCN)2+或Fe(SCN)63-等。但是多数无机显色剂的灵敏度和选择性都不高，其中性能较好，目前还有实用价值的有硫氰酸盐、钼酸铵、氨水和过氧化氢等。(2)有机显色剂许多有机试剂，在一定条件下，能与金属离子生成有色的金属螯合物(具有环状结构的络合物)。将金属螯合物应用于光度分析中的优点1)测定的灵敏度很高。大部分金属螯合物都呈现鲜明的颜色，摩尔吸光系数大于104；2)金属螯合物都很稳定。一般离解常数都很小，而且能抗辐射；3)专用性强。绝大多数有机整合剂，在一定条件下，只与少数或其一种金属离子络合，而且同一种有机螯合剂与不同的金属离子络合时，生成具有特征颜色的螯合物。4)发展了萃取光度法。虽然大部分金属螯合物难溶于水，但可被萃取到有机溶剂中。因此,有机显色剂是光度分析中应用最多最广的显色剂，寻找高选择性、高灵敏度的有机显色剂，是光度分析发展和研究的重要内容。助色团和生色团生色团:在有机化合物分子中，凡是包含有共轭双键的基团如—N＝N—、—N＝O、—NO2、对醌基、＝C＝O(羰基)、＝C＝S(硫羰基)等，一般都具有颜色，原因是这些基团中的л电子被光激发时，只需要较小的能量，能吸收波长大于200nm的光，因此，称这些基团为生色团；助色团:某些含有未共用电子对的基团如胺基—NH2，RHN—，R2N—(具有一对未共用电子对)，羟基-OH(具有两对末共用电子对)，以及卤代基—F，—Cl，—Br，—I等，它们与生色基团上的不饱和键互相作用，引起永久性的电荷移动，从而减小了分子的活化能促使试剂对光的最大吸收“红移”(